^[1]反応チューブの数を計算します（サンプル数+陽性対照+陰性対照）。 各テストでネガティブコントロールとポジティブコントロールの両方を設定することをお勧めします。

上記の混合物を完全に混合し、30μLのアリコートを異なるPCR反応チューブに入れます。 次に、標本準備エリアに移動します。

3. テンプレートの追加（標本準備エリア）

20μLの抽出したネガティブコントロール製品、20μLの抽出したポジティブコントロール製品、および20μLの検体からの抽出したRNAを、30μLのPCRミックスを含む異なるPCR反応チューブに追加します。 総容量は50μLです。 反応チューブにしっかりと蓋をし、低速で遠心します。 次に、検出領域に移動します。

4.RT-PCR増幅（検出エリア）

PCR機器に反応チューブを置き、次のサイクリングプロトコルをセットアップして実行します。

検出蛍光の設定：ORF1ab遺伝子（FAM）、N遺伝子（TEXAS RED / ROX）、内部対照（HEX / VIC）。 装置の蛍光の内部参照パラメーターを「なし」に設定してください。 例：ABIシリーズ機器の場合、「パッシブリファレンス」を「なし」に設定してください。

5. データ分析（機器のユーザーマニュアルを参照）

例としてABI7500を取り上げます。qPCR反応後、結果は自動的に保存されました。 分析された画像に従って、ベースラインの開始値、終了値、およびしきい値を調整します（開始値：3〜15;終了値：5〜20;しきい値はログウィンドウで設定でき、しきい値ラインは 増幅曲線の指数関数的フェーズにある;陰性対照の増幅曲線はまっすぐであるか、閾値線より下でなければなりません）。

「分析」をクリックすると、分析結果が自動的に取得され、「レポート」ウィンドウで検出結果が表示されます。

上記のすべての基準が満たされている場合、結果は有効です。 それ以外の場合、結果は無効です。

品質管理の基準が満たされている場合は、サンプルのデータを次のように分析します。

1. HEX / VIC（内部制御）チャネルのCt値が> 33の場合、検出された検体に含まれる細胞の濃度が低いか、抽出された核酸が分解されたか、反応に特定の阻害剤が存在した可能性があります。

2. HEX / VICチャネルのCt値が33以下の場合、次の表に従って結果を分析します。:

*サンプルがウイルス培養から抽出された場合、HEX / VICチャネルテスト結果は必要ありません。

*疑わしいサンプルについては、検体を再収集するか、収集場所を変更してから、検体を再度テストすることをお勧めします。

• この製品の検出結果は臨床参照用であり、臨床診断と治療の唯一の証拠として使用するべきではありません。 患者の臨床管理は、症状/徴候、病歴、他の臨床検査および治療反応と組み合わせて検討する必要があります。
• 検出結果は臨床診断のエビデンスとして直接使用するべきではなく、臨床医の参照のみを目的としています。
• 検体の採取、保管、輸送などの操作により、検出結果が影響を受けることがあります。 操作に誤りがあると、偽陰性の結果となる場合があります。 検体処理中の相互汚染は、偽陽性の結果につながる可能性があります。
• これらの製品の検出されたターゲット配列は、2019-nCoVのORF1ab遺伝子とN遺伝子の保存領域です。 ただし、ターゲットシーケンスのバリエーションは、偽陰性の結果につながる可能性があります。
• このキットは研究専用です。

1. 検出限界：200コピー/ mL。
2. 精度：バッチ内およびバッチ間検出に高精度リファレンスCV1およびCV2を使用すると、それらのCt値の変動係数（CV）は5.0％以下です。
3. ネガティブコントロールの適合率：100％
4. Positive Controlの適合率：100％
5. 特異性：インフルエンザAウイルス（H1N1、H3N2、H7N9、H5N1）、インフルエンザBウイルス（山形、ビクトリア）、呼吸器合胞体ウイルス（タイプB）、呼吸器アデノウイルス（タイプ3、タイプ7）、インフルエンザ菌の非特異的干渉、 黄色ブドウ球菌、肺炎球菌など

• 実験を始める前に本書をよくお読みになり、指示に従ってください。
• この製品は、安全が保護された実験室で訓練を受けた労働者のみが使用し、適切な保護具を着用する必要があります。
• この製品は光から保護する必要があります。 検出時には、滅菌済み、DNaseフリー、RNaseフリーのチューブとチップを使用してください。
• この製品のテストされた検体は感染性物質と見なされます。
• 操作と治療は、地域の規制と法律の要件を満たす必要があります。