ELISA மதிப்பீடு, கொள்கை, நெறிமுறைகள், முறைகள் மற்றும் கருவிகள்

ELISA (என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் மதிப்பீடு) என்பது உயிரியல் மாதிரிகளில் உள்ள புரதங்கள், பெப்டைடுகள், ஹார்மோன்கள் அல்லது ரசாயனங்களின் அளவை அளவிட ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலான நுட்பமாகும். ஒரு சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீட்டில், 96 குழி தட்டின் மேற்பரப்பில் ஒரு பிடிப்பு ஆன்டிபாடி அசையாமல் இருக்கும், இதைத் தொடர்ந்து ஒரு மாதிரி சேர்க்கப்படும், இதில் தேவையான மதிப்பாய்வு கூறுகள் மற்றும் ஆன்டிபாடிக்கு இடையிலான மாதிரிகள் இருக்கும், இது மாதிரியை உருவாக்குகிறது. அடைகாக்கும் படிநிலையைத் தொடர்ந்து, ஒட்டாத பகுப்பாய்வு கூறுகளை அகற்ற குழியானது ஒரு கழுவும் இடையகத்தைப் பயன்படுத்தி கழுவப்படுகிறது. கண்டறியும் ஆன்டிபாடியைச் சேர்க்கப்பட்டதைத் தொடர்ந்து கண்டறிதல் நிகழ்கிறது, இது நொதியுடன் இணைகிறது. அடைகாப்பதைத் தொடர்ந்து அதிகப்படியான ஆன்டிபாடி மற்றும் குறிப்பிடப்படாத பிணைப்பு புரதங்களை அகற்ற மற்றொரு கழுவும் படிநிலை மேற்கொள்ளப்படுகிறது. பின்னர் அடி மூலக்கூறு சேர்க்கப்பட்டு கலோரிமெட்ரிக் மாற்றம் ஏற்படுகிறது. மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வு கூறுகளின் அளவு வண்ண மாற்றம் அதிகரிக்கும் அடர்த்தியுடன் தொடர்புடையது. இறுதியாக நிறுத்த கரைசல் சேர்க்கப்படுகிறது. நெறிமுறை முடிந்ததும், மாதிரிகள் ஒரு ELISA தட்டு ரீடரில் பகுப்பாய்வு செய்யப்படுகின்றன மற்றும் முடிவுகளை குறிக்க மற்றும் கணக்கிட ஒரு மென்பொருள் நிரல் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

ELISA மதிப்பீடுகள் 96 அல்லது 384 குழி பாலிஸ்டிரீன் தகடுகளில் மேற்கொள்ளப்படுகின்றன. புரதங்கள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகள் அடைகாப்பதைத் தொடர்ந்து 96 குழி ELISA தட்டுக்கு நகராது. ஒரு சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீட்டில் ஒரு பிடிப்பு ஆன்டிபாடி ELISA தட்டுக்கு அசையாமல் இருக்கும். இருப்பினும், ஒரு போட்டி சார்ந்த ELISA மதிப்பீட்டில், தேவையான பகுப்பாய்வு கூறு ELISA தட்டுடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது. ELISA மதிப்பீட்டின் போது குறிப்பிடப்படாத புரதங்கள் பிணைப்பதைத் தடுக்க BSA தடுக்கும் கரைசலைக் கொண்டு ELISA தட்டு தடுக்கப்படுகிறது.

ஆன்டிபாடிகள் அல்லது பகுப்பாய்வு கூறுகள் தட்டுகளுடன் பிணைந்திருப்பது கழுவும் இடையகம் மூலம் கழுவும் படிநிலைகளை அனுமதிக்கிறது, இதனால் குறிப்பிடப்படாத பிணைக்கும் பகுப்பாய்வு கூறுகளை நீக்குகிறது.

450nm இல் ELISA தட்டு ரீடரில் உறிஞ்சுதலைப் படிக்க தட்டு ரீடரை அனுமதிக்க ELISA தட்டுகளின் அடிப்பகுதி தட்டையாக இருக்கின்றன.

இம்யூனோ மதிப்பீடு என்பது தேவையான ஆன்டிஜெனைக் கண்டறிய ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தும் ஒரு மதிப்பீடாகும். EIA (நொதி இம்யூனோ மதிப்பீடு) என்பது ஒரு கண்டறியப்பட்ட ஆன்டிபாடியுடன் இணைந்த ஒரு நொதியைப் பயன்படுத்தி கண்டறிவதற்கும் அளவீடு செய்வதற்கும் அனுமதிக்கிறது. EIA இன் இரண்டு எடுத்துக்காட்டுகள் வெஸ்டர்ன் பிளாட் மற்றும் ELISA ஆகும். வெஸ்டர்ன் பிளட் என்பது EIA ஆகும், இது புரதங்களை நகர முடியாமல் ஆக்க நைட்ரோசெல்லுலோஸ் அல்லது PVDF என்பதை பயன்படுத்தியது. இதனைத் தொடர்ந்து தேவையான புரதத்தை பிணைக்க ஒரு முதன்மை ஆன்டிபாடியைச் சேர்க்கப்படுகிறது, அதன்பிறகு உங்களுக்கு தேவையான பகுப்பாய்வு கூறை கண்டறிய ஒரு நொதி இணைந்த-இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடியுடன் அடைகாக்கப்படுகிறது. ELISA மதிப்பீட்டில், பிடிப்பு ஆன்டிபாடி ஒரு பாலிஸ்டிரீன் தட்டில் அசையாமல் இருக்கும், அதன்பிறகு தேவையான பகுப்பாய்வு கூறைக் கொண்ட ஒரு மாதிரி அடைக்காக்கபப்டும், அதன்பிறகு TMB-யை ஒரு அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தி கண்டறியும் ஆன்டிபாடி மற்றும் கலோரிமெட்ரிக் மாற்றம் கண்டறியப்படுகிறது.

ஒரு ELISA மதிப்பீடு, ஆராய்ச்சியாளர்கள் தங்கள் மாதிரியில் (சீரம், பிளாஸ்மா, சூப்பர்நேட்டண்ட், பால், சிறுநீர்) உள்ள பகுப்பாய்வின் அளவை வரையறுக்கப்பட்ட வரம்பிற்குள் அறியப்பட்ட தரங்களின் தொகுப்பைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்க அனுமதிக்கிறது. நீங்கள் ELISA மதிப்பீட்டை மேற்கொள்ளும்போது, அறியப்பட்ட பகுப்பாய்வு கூறின் செறிவு என்பது ஒரு மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வு கூறுகள் அளவின் அளவுகோலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இவை தரநிலைகள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன. ஒரு ELISA மதிப்பீட்டின் போது, தரநிலையின் ஒரு பங்கு வழங்கப்படுகிறது, வழக்கமாக ng / mL அல்லது pg / mL அளவில், ஒரு தொகுதியில் ஒரு பகுப்பாய்வின் அறியப்பட்ட செறிவுகளின் வரம்பை வழங்க இந்த பங்கு 6-7 மடங்கு நீர்க்கப்படுகிறது. மதிப்புகளைத் குறிக்கும்போது ஒரு நிலையான வளைவு உருவாக்கப்பட்டு, இந்த மதிப்புகளுக்கு எதிராக அறியப்படாத மாதிரிகளின் செறிவுகள் கணக்கிடப்படுகின்றன.

ஆய்வாளர்கள் தங்கள் அன்றாட ஆய்வுகளில் 6 முக்கிய வகையான ELISA மதிப்பீடுகளை பயன்படுத்துகின்றனர், மிகவும் பொதுவானது சாண்ட்விச் & போட்டிக்குரிய ELISA மதிப்பீடுகள், அதைத் தொடர்ந்து ELISpot மற்றும் மறைமுக ELISA மதிப்பீடுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீடுகள் ELISAவின் மிகவும் பொதுவான வடிவமாகும், மேலும் கண்டறிவதற்கு பகுப்பாய்வு கூறுகளின் இடையில் பிடிப்பு மற்றும் கண்டறியும் ஆன்டிபாடி சாண்ட்விச் போன்று உருவாகுவதால் இது இப்பெயர் பெற்றது. மேலே குறிப்பிட்டுள்ளபடி, சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீடுகள் அவற்றின் பிடிப்பு ஆன்டிபாடியை ஒரு பாலிஸ்டிரீன் ELISA தட்டில் அசையாமல் வைத்திருக்கின்றன. பின்னர் மாதிரி ELISA தட்டின் குழியில் அடைக்காக்கப்பட்டு, அதைத் தொடர்ந்து கழுவப்படுகிறது. அடைக்கப்புக்கு பிறகு கண்டறியும் ஆன்டிபாடியுடன் இணைக்கப்பட்ட ஒரு நொதி சேர்க்கப்படுகிறது. இறுதியாக பகுப்பாய்வு கூறுகளின் அளவை மதிப்பிடுவதற்கு அடி மூலக்கூறு மற்றும் நிறுத்த கரைசல் சேர்க்கப்படுகிறது.

போட்டிக்குரிய ELISA மதிப்பீடுகள் பெரும்பாலும் ஹார்மோன்களைக் கண்டறியப் பயன்படுகின்றன. ஒரு போட்டிக்குரிய ELISA மதிப்பீட்டில், பாலிஸ்டிரீன் ELISA தட்டில் பகுப்பாய்வு கூறு அசையாமல் இருக்கிறது. பிடிப்பு ஆன்டிபாடிக்கான தட்டில் அசையாத பகுப்பாய்வோடு மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வு போட்டியிடுவதால் இது இப்பெயர் பெற்றது. எனவே ஒரு மாதிரியில் அதிகரித்த பகுப்பாய்வு கூறுகளின் அளவு சமிக்ஞையை குறைக்கும், இதன் விளைவாக சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீட்டில் நீங்கள் காணும் வரைபடத்திற்கு நேர்மாறாக இருக்கும்.

தடுப்பூசி வளர்ச்சி, கால்நடை ஆராய்ச்சி, மோனோசைட்டுகள் / மேக்ரோபேஜ்கள் / டென்ட்ரிடிக் செல்கள் தன்மைக்கு ஒரு ELISpot மதிப்பீடு பொதுவாக பயன்படுத்தப்படுகிறது. ELISpot இன் கொள்கை ஒரு சாண்ட்விச் ELISA மதிப்பீட்டைப் போன்றது, இதன் மூலம் ஒரு தட்டு பிடிப்பு ஆன்டிபாடிகள் மூலம் பூசப்படுகிறது. கலங்கள் பின்னர் ELISA தட்டில் 3 மணி நேரம் அடைகாக்கப்படும், இது பயன்பாட்டைப் பொறுத்தது. உயிரணுக்களால் உற்பத்தி செய்யப்படும் சைட்டோகின்கள் பின்னர் ELISA தட்டில் அசையாத பிடிப்பு ஆன்டிபாடியால் பிணைக்கப்படுகின்றன. செல்கள் பின்னர் ELISA தட்டில் இருந்து கழுவப்பட்டு ஒரு கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படுகிறது, அதைத் தொடர்ந்து சைட்டோகின்களைக் கண்டறிய அனுமதிக்கும் ஒரு அடி மூலக்கூறு மற்றும் நிறுத்த கரைசல் சேர்க்கப்படுகிறது.

ஒரு ஃப்ளோரோஸ்பாட் ELISA மதிப்பீடு ELISpot ELISAவிற்கு ஒத்ததாக இருக்கிறது, இருப்பினும், ஒரு நொதி-இணைக்கப்பட்ட கண்டறிதல் ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்துவதற்குப் பதிலாக, கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி ஒரு ஃப்ளோரோஃபோருடன் இணைக்கப்பட்டு கண்டறிய மற்றும் பகுப்பாய்வு செய்ய பயன்படுத்தப்படுகிறது.

மறைமுக ELISA மதிப்பீட்டில், தேவையான பகுப்பாய்வு கூறு முதன்மை பிடிப்பு ஆன்டிபாடியால் பிணைக்கப்படுகிறது. முதன்மை ஆன்டிபாடியை பிணைக்க இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி பயன்படுத்தப்படுகிறது. இது வெஸ்டர்ன் பிளட் மதிப்பீட்டு முறைக்கு ஒத்ததாகும்.

நேரடி ELISA நுட்பம் ஒரு மதிப்பீடாகும், இதன்மூலம், ஒரு நொதியுடன் பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிபாடி கரைசலில் உள்ள ஒரு பகுப்பாய்வு கூறுடன் பிணைக்கப் பயன்படுகிறது. பிணைக்கப்பட்டவுடன், நொதி-லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிபாடி ஒரு அடி மூலக்கூறுடன் வினைபுரிந்து வண்ண மாற்றத்தை அளிக்கும், இது பகுப்பாய்வு கூறுகளை அளவிட அனுமதிக்கிறது. பிடிப்பு ஆன்டிபாடி இரண்டு செயல்பாடுகளையும் செய்வதால் இது இரண்டாம் நிலை கண்டறிதல் ஆன்டிபாடியின் தேவையை நீக்குகிறது.

மல்டிபிளக்ஸ் ELISA மதிப்பீடு ஒரு மாதிரியில் பல பகுப்பாய்வு கூறுகளை பகுப்பாய்வு செய்ய ஆராய்ச்சியாளர்களை அனுமதிக்கிறது. ஒரு மாதிரியில் பல சைட்டோகின்களை ஒரே நேரத்தில் அளவிட ஆராய்ச்சியாளர்கள் பார்க்கும்போது இது மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும். ஓட்டம் சைட்டோமெட்ரி, தட்டு அடிப்படையிலான மல்டிப்ளெக்ஸ் அல்லது PVDF அல்லது நைட்ரோசெல்லுலோஸ் படலங்களைப் பயன்படுத்துதல் உள்ளிட்ட பல வடிவங்கள் மூலம் மல்டிப்ளெக்ஸ் ELISA மதிப்பீடுகளை மேற்கொள்ளலாம்.

CLIA மதிப்பீடுகள் ஒரு சாண்ட்விச் மதிப்பீட்டுடன் கொள்கையளவில் ஒத்திருக்கின்றன, இருப்பினும், மாதிரிகளைக் கண்டறிவதற்கு ஒரு குரோமோஜெனிக் அடி மூலக்கூறைப் பயன்படுத்துவதற்குப் பதிலாக, CLIA மதிப்பீடுகள் கெமிலுமுமினசென்ட் அடிப்படையிலானவை பயன்படுத்தப்படுகின்றன. ஒரு CLIA மதிப்பீட்டில், கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி ஒரு அடி மூலக்கூறை ஒளியாக மாற்றுகிறது. உருவாக்கப்படும் ஃபோட்டான்களின் அளவு ஒரு மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வின் அளவிற்கு விகிதாசாரமாகும். ஒரு மதிப்பீட்டில் உள்ள மாதிரியின் அளவை அளவிட லுமினென்சென்ஸ் ஒரு லுமினோமீட்டரால் ஒப்பீட்டு ஒளி அலகுகளில் (ஆர்.எல்.யூ) அளவிடப்படுகிறது.

CLIA மதிப்பீடுகள் பொதுவாக குறைந்த செறிவு பகுப்பாய்வுகளைக் கண்டறிவதற்குப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன (கண்டறிதலின் வரம்பு = செப்டோமோல் 10-21 மோல்).

உயிரணுக்குள்ளான ELISA என்பது ஒரு மறைமுக ELISA நுட்பமாகும், மேலும் இது ஒரு பாலிஸ்டிரீன் ELISA தட்டில் இரவு முழுவதும் பூசப்பட்ட மற்றும் வளர்க்கப்பட்ட கலங்களைப் பயன்படுத்தி செய்யப்படுகிறது. கலங்கள் பின்னர் சரி செய்யப்பட்டு, ஊடுருவி, தடுக்கப்படுகின்றன. இலக்கு புரதங்கள் முதன்மை ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்தி கண்டறியப்படுகின்றன, அவை நொதி இணைந்ததாகவோ அல்லது ஒளிரும் வகையில் (ஃப்ளோரசன்ட்) குறிக்கப்பட்டதாகவோ இருக்கும். ஃப்ளோரசன்ட் குறியிடப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் ஃப்ளோரசன்ட் தட்டு ரீடர் அல்லது நுண்ணோக்கி மூலம் கண்டறிய அனுமதிக்கின்றன, அதேசமயம் நொதி இணைந்த இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடிகள் ஒரு தட்டு ரீடர் மூலம் கண்டறிய அனுமதிக்கும்.

உங்கள் மாதிரியில் உள்ள பகுப்பாய்வு கூறுகளின் அளவை அளவிடுவதற்கான கடைசி கட்டமாக ELISAவில் கண்டறிதல் படிநிலை உள்ளது. கண்டறிதல் படிநிலையின் போது உருவாக்கப்படும் சமிக்ஞை ஒரு அளவிற்கு விகிதாசாரமாகும். ஒரு ELISAவில் பகுப்பாய்வுகளைக் கண்டறிவதற்கு மூன்று விருப்பங்கள் உள்ளன; கதிரியக்க (ரேடியோஇம்முனோசே) அல்லது ஒளிரும் (ஃப்ளோரசன்ட்) குறிச்சொற்கள் அல்லது குரோமோஜெனிக் அடி மூலக்கூறைப் பயன்படுத்துதல்.

குரோமோஜெனிக் என்பது ELISA கண்டறிதலுக்கான மிகவும் பிரபலமான மற்றும் மிகவும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் நுட்பமாகும், மேலும் இதில் குதிரை முள்ளங்கி பெராக்ஸிடேஸ் (HRP) அடி மூலக்கூறு TMB (3, 3 ', 5, 5'-டெட்ராமெதில் பென்சிடைன்) அடங்கும், இது ஆக்ஸிஜனேற்றப்படும்போது நீல நிறத்தை அளிக்கிறது மற்றும் கந்தக அமிலம் சேர்க்கப்படும்போது மஞ்சள் நிறமாக மாறும். இது ஒரு ELISA தட்டு ரீடரில் 450nm இல் மாதிரிகளைப் படிக்க அனுமதிக்கிறது.

425 nm வேகத்தில் ஒளியை வெளியிடும் ஒரு அடி மூலக்கூறாக லுமினோலைப் பயன்படுத்தி HRP அடிப்படையில் கெமிலுமுமின்சென்ஸ் போன்ற பிற கண்டறிதல் முறைகள் பயன்படுத்தப்படலாம்.

ELISA ஜெனியில், சைட்டோகின்கள், கெமோக்கின்கள், ஹார்மோன்கள், சிக்னலிங் புரதங்கள் மற்றும் 1000 பயோமார்க்ஸர்களைக் கண்டறிவதற்கு, நாங்கள் பல்வேறு வகையான தயார் நிலையில் இருக்கும் முன் பூசப்பட்ட எலிசா கருவிகள் மற்றும் எலிசா மேம்பாட்டு கருவிகளை வழங்குகிறோம்.

ELISA ஜெனி ELISA கருவிகளில் முன் பூசப்பட்ட ELISA தட்டுகள், பிடிப்பு மற்றும் கண்டறிதல் ஆன்டிபாடிகள், கழுவும் இடையகம், நிலையான நீர்த்த இடையகம், TMB, நிறுத்த கரைசல் ஆகியவை உள்ளன. மனித, சுண்டெலி, எலி, போர்சின், போவின் மற்றும் பலவற்றையும் உள்ளடக்கிய பல வகையான உயிரினங்களுக்கான கருவிகளையும் நாங்கள் வழங்குகிறோம்.

ELISA ஜெனியிலிருந்து வரும் பார்மாஜெனி ELISA கருவிகள் மருந்துகள் மற்றும் பயோடெக் ஆராய்ச்சியின் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய வடிவமைக்கப்பட்ட உயர் தரமான எலிசா கருவிகள். ISO 9001: 2000 தர அமைப்புகளின் படி சரிபார்க்கப்பட்ட உயர்தர மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி ஜோடிகள் மற்றும் வினையாக்கிகள் ஆகியவற்றின் மீது கவனம் செலுத்துதல், பார்மாஜெனி ELISA கருவிகள் நமது எதிர்காலத்தைக் கண்டறிய உதவும் சிறந்த மதிப்பீடுகள்.

• ISO 9001: 2000 தர அமைப்புகளின்படி எங்கள் அனைத்து எதிர்வினைகளும் சரிபார்க்கப்பட்டதால் துல்லியம் மற்றும் நம்பகத்தன்மை உறுதி செய்யப்படுகின்றன
• இயற்கை மற்றும் மறுசீரமைப்பு ஆன்டிஜென் விவரக்குறிப்பு இரண்டையும் அங்கீகரிக்கிறது
• சோதிக்கப்பட்ட பிற மனித சைட்டோகைன்களுடன் குறுக்கு வினைத்திறன் இல்லை
• NIBSC க்கு நிலையான அளவுத்திருத்தம்
• மேம்பட்ட ELISA கருவிகள் (ஆன்டிபாடி சோடிகள்)
• ஆன்டிபாடி ஜோடிகள் ஆராய்ச்சியை அனுமதிக்கின்றன

மேம்பட்ட ELISA கருவிகள் ஆராய்ச்சியாளர்கள் தங்கள் சொந்த ELISA தட்டுகளை உருவாக்க அனுமதிக்கின்றன. மேம்பட்ட ELISA கருவிகள் ஆன்டிபாடி ஜோடிகள் (பொருந்திய பிடிப்பு மற்றும் கண்டறிதல் ஆன்டிபாடிகள்) மற்றும் இடையகங்களுடன் வருகின்றன. இது ஆராய்ச்சியாளர்கள் தங்கள் சொந்த ELISA கருவிகளை பூசவும் தட்டவும் அனுமதிக்கிறது. சூப்பர் செட் ELISA கிட்கள் எனப்படும் ELISA கருவிகளை ELISA ஜெனி வழங்குகிறது.

• மிகவும் உகந்த மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி ஜோடி.
• நிலையான தரநிலை வளைவுகளை உருவாக்க உயர் தரமான சுத்திகரிக்கப்பட்ட மறுசீரமைப்பு புரதம்.
• ISO 9001: 2000 தர அமைப்புகளின் படி எதிர்வினைகள் சரிபார்க்கப்பட்டுள்ளன.
• இயற்கை மற்றும் மறுசீரமைப்பு ஆன்டிஜென் விவரக்குறிப்பு.
• சோதிக்கப்பட்ட பிற சைட்டோகைன்களுடன் குறுக்கு வினைத்திறன் இல்லை.
• NIBSC க்கு நிலையான அளவுத்திருத்தம்.
• ELISA கிட்ஸ் மருந்து மற்றும் பயோடெக் ஆராய்ச்சி துறைகளை மனதில் கொண்டு உருவாக்கப்பட்டது.
• திறமையான ஆராய்ச்சிக்கான வெவ்வேறு அளவுகளை உடைய கருவிகள்!

ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிந்து கைப்பற்ற மோனோக்ளோனல் அல்லது பாலிக்குளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி ELISA கருவிகள் தயாரிக்கப்படுகின்றன. ஒற்றை எபிடோப்பை அங்கீகரிப்பதற்கான பலனை மோனோக்ளோனல்கள் வழங்குகின்றன, எனவே ஒரு குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜெனின் துல்லியமான பகுப்பாய்வை வழங்குகின்றன. இருப்பினும், அதிகரித்த அளவு ஆன்டிஜெனைக் கைப்பற்றும் நன்மை பாலிக்குளோனல்களுக்கு உண்டு. சமீபத்தில், ELISA கருவிகளை உருவாக்க மறுசீரமைப்பு மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகள் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன, இதன் மூலம் அதிகரித்த தனித்தன்மை மற்றும் நிலைத்தன்மையை வழங்குகிறது.

IL-1 பீட்டா, IFN- காமா, IL-2, IL-4, IL-6, CXCL8 / IL-8 மற்றும் பல இலக்குகளை உள்ளடக்கிய முக்கிய சைட்டோகின் இலக்குகளுக்கான உயர்தர மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி ELISA ஜெனி பார்மாஜெனி வகை ELISA கருவிகள் தயாரிக்கப்படுகின்றன.

ஒரு ELISA மதிப்பீட்டு தட்டில் குறிப்பிடப்படாத புரதங்களின் பிணைப்பைத் தடுக்க, தட்டுக்கு பூச்சு செய்ய தடுப்பு இடையகங்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. ஒரு ELISA தட்டின் பிணைப்பு திறன் தட்டில் பூசப்பட்ட புரதம் பூசப்பட்ட (பிடிப்பு ஆன்டிபாடி / ஆன்டிஜென்) அளவை விட அதிகமாக உள்ளது. ஆகையால், அடுத்தடுத்த அடைகாக்கும் படிநிலைகளின் போது ஆன்டிபாடிகள் அல்லது பிற புரதங்களை குறிப்பிட்ட பிணைப்பைத் தடுக்க மீதமுள்ள பகுதி தடுக்கப்பட வேண்டும். எனவே ஒரு தடுப்பு இடையகமானது ஒரு புரதத்தைப் பயன்படுத்தி பயன்படுத்தப்படுகிறது, அது பிணைக்கப்படாது அல்லது பிற புரதங்களுடன் அல்லது அடுத்தடுத்த படிகளில் கண்டறிதல் ஆன்டிபாடிகள் உடன் சிக்கல்களை உருவாக்காது. ஆகையால், தடுப்பு இடையக ELISA உணர்திறனை அதிகரிக்கிறது, ஏனெனில் இது பிரத்தியேகமற்ற புரதங்களை பிணைப்பதைத் தடுக்கிறது, பின்னணி இரைச்சலைக் குறைக்கிறது, எனவே சிக்னல் சத்தத்திற்கான விகிதத்தை அதிகரிக்கிறது.

ELISA வளர்ச்சியின் போது, ​​மதிப்பீட்டை மேம்படுத்தவும், சத்தம் சமிக்ஞை விகிதத்தை மேம்படுத்தவும் பல்வேறு தடுப்பு இடையகங்கள் சோதிக்கப்பட வேண்டும். புரதங்களின் குறிப்பிடப்படாத பிணைப்பை பாதிக்கும் காரணிகள் புரதத்தின் உருவாக்கம்: புரத இடைவினைகள். ஒரு தொகுதி இடையகத்தை மேம்படுத்தும் போது, ​​சத்தம் சமிக்ஞை விகித அதிகரிப்பதை மேம்படுத்துவதே முக்கியமாகும், இலக்கு பகுப்பாய்வோடு மாதிரியைச் சேர்க்காமல் ஒரு கட்டுப்பாட்டை நன்கு பயன்படுத்துவதன் மூலம் இது கண்டறியப்படுகிறது.

தடுப்பு இடையகத்தை உகப்பாக்கம் போது, ​​தடுப்பானின் அதிகப்படியான செறிவுகளைப் பயன்படுத்தக்கூடாது என்பதும் முக்கியம், இது ஆன்டிபாடி-ஆன்டிஜென் இடைவினைகளைத் தடுக்கலாம் அல்லது நொதி செயல்பாட்டைத் தடுக்கக்கூடும், இதனால் சிக்னல் இரைச்சல் விகிதம் குறைகிறது. தடுப்பதை மேம்படுத்தும்போது, ​​சிறந்த சமிக்ஞையை மேம்படுத்த சில இடையகங்கள் சோதிக்கப்படலாம்.

மைக்ரோடிட்ரே தகடுகளில் புரதங்கள் / பகுப்பாய்வு கூறுகள் அல்லது ஆன்டிபாடிகளை அசைக்க முடியாமல் ஆக்க ஒரு ELISA பூச்சு இடையகம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. மைக்ரோடிட்ரே தகடுகளில் பகுப்பாய்வு கூறுகள் / ஆன்டிபாடிகளை அசையாமல் இருப்பதற்கான முக்கிய காரணிகள் பூச்சு இடையகத்தின் pH ஆக இருக்கலாம். PH 7.4 மற்றும் pH 9.6 க்கு இடையிலான ஒரு பூச்சு இடையகத்தைத் தேர்ந்தெடுப்பது புரதம் / ஆன்டிபாடி / பகுப்பாய்வு கூறு பிணைப்பின் ஸ்டெரிக் கட்டமைப்பில் தாக்கத்தை ஏற்படுத்தக்கூடும், இது அவற்றின் அசையாமையை பாதிக்கும். பூச்சு இடையகங்களை சோதிப்பது அசைவற்ற ஆன்டிபாடிகளின் இயக்கம் மற்றும் செயல்திறனை அதிகரிக்க உதவும். ஒரு தட்டுக்கான சூப்பர்செட் மேம்பாட்டு ELISA கருவிகளில், 10 மில்லி பூச்சு இடையகத்தில் 100µl பிடிப்பு ஆன்டிபாடியைச் சேர்க்கவும்.

அடைகாக்கும் படிநிலைகளைத் தொடர்ந்து, பின்னணி சமிக்ஞையைக் குறைப்பதற்கு பிணைக்கப்பட்ட குறிப்பிடப்படாத புரதங்கள் மற்றும் வினையாக்கிகளை அகற்ற கழுவும் படிநிலைகள் தேவை. ஒவ்வொரு கருவிக்கும், ஒரு குறிப்பிட்ட அளவு கழுவும் படிநிலைகள் தேவை. கழுவும் போது, அதிக எண்ணிக்கையிலான கழுவும் படிநிலைகள் அதிக பின்புலங்களை விளைகின்றன, இருப்பினும், மாறாக, அதிகப்படியான கழுவுதல் ELISA தட்டில் இருந்து ஆன்டிபாடி மற்றும் / அல்லது ஆன்டிஜெனை அகற்றுவதால் உணர்திறன் மற்றும் சமிக்ஞை குறையும். கழுவும் படிநிலைகளை கைமுறையாக மேற்கொள்வதை விட தட்டு வாஷரைப் பயன்படுத்தி தானியங்கி மூலம் கழுவுதல் மிகவும் திறன்மிக்கதாக இருக்கக்கூடும்.

கழுவுதல் படிநிலைகள் ஒரு TBS (டிரிஸ்-பஃபெர்டு சலைன்) அல்லது PBS (பாஸ்பேட்-பஃபெர்டு சலைன்) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி செய்யப்படுகின்றன. கூடுதலாக, குறிப்பிடப்படாத பிணைப்பு புரதங்களை அகற்ற 0.5% டுவீன் -20 சேர்க்கப்படலாம்.

உங்கள் ELISA நெறிமுறை நிறைவடைந்ததைத் தொடர்ந்து, அடுத்த கட்டமாக ELISA தட்டு ரீடரைப் பயன்படுத்தி தரவைப் பெற்று பகுப்பாய்வு செய்ய வேண்டும்.

ELISA சோதனை மேற்கொள்ளும்போது, ​​உங்கள் முடிவுகளின் புள்ளிவிவர முக்கியத்துவத்தை உறுதிப்படுத்த உங்கள் மாதிரிகளை நகல் அல்லது மும்மடங்காக இயக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. மேலும், தரநிலைகள், அறியப்பட்ட நேர்மறை கட்டுப்பாடுகள் மற்றும் விருப்பமான ஆன்டிஜென் இல்லாத வெற்றிடங்கள் அல்லது மாதிரிகள் போன்ற எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகள் போன்ற நேர்மறையான கட்டுப்பாடுகள் தேவைப்படலாம்.

• எதிர்மறை கட்டுப்பாடுகள்: உங்கள் பகுப்பாய்வு கூறுகள் முன்னிலையில் இல்லாத மாதிரிகள்
• நேர்மறையான கட்டுப்பாடுகள்: உங்கள் பகுப்பாய்வின் அறியப்பட்ட இருப்பு அல்லது அளவு கொண்ட மாதிரிகள்

பயன்படுத்தப்படும் ELISA வகையைப் பொறுத்து (தரமான, அரை அளவு அல்லது அளவு) தரவு வெளியீடு மாறுபடும். எனவே நீங்கள் பகுப்பாய்வு செய்ய விரும்பும் தரவின் அடிப்படையில் நீங்கள் பயன்படுத்த விரும்பும் குறிப்பிட்ட ELISA ஐ தேர்வு செய்கிறீர்கள். மாதிரியின் பதிவு செறிவுக்கு எதிராக ஆப்டிகல் அடர்த்தி (OD) குறிப்பு மூலம் தரவு வழங்கப்படுகிறது. அறிந்த செறிவுகளைக் கொண்ட தரநிலைகள் ஒரு நிலையான வளைவை உருவாக்கப் பயன்படுகின்றன, அதில் இருந்து அறியப்படாத பகுப்பாய்வு கூறுகளின் செறிவு தீர்மானிக்கப்படுகிறது.

மாறுபாட்டின் குணகம் முடிவுகளில் ஏதேனும் முரண்பாடுகள் மற்றும் தவறுகளை அடையாளம் காண உதவுகிறது. இது சராசரிக்கு மாறுபடும் சதவீதமாக வெளிப்படுத்தப்படுகிறது. எந்தளவுக்கு மாறுபாடு அதிகமாக இருக்கிறதோ அந்தளவுக்கு முரண்பாடு மற்றும் பிழை அதிகமாக இருக்கும். குணக மாறுபாடு (CV) என்பது நிலையான விலகல் σ மற்றும் சராசரி µ உடைய விகிதமாகும்:

Cv= σ/µ

அதிகப்படியான CV பின்வருவனவற்றில் சில அல்லது எல்லா பிழைகளுக்கும் பங்களிக்கக்கூடும்:

• உறிஞ்சளவி பிழைகள்
• பாக்டீரியா / பூஞ்சை அல்லது பிற வினையாக்கிகளுடனான மாதிரி மாசுபாடு
• வெப்பநிலை மாறுபாடு- வரைவுகளிலிருந்து விலகி நிலையான வெப்பநிலையில் தட்டுகளை அடைக்காக்க வேண்டும்.
• குழிகள் உலர்ந்து இருத்தல் - அனைத்து அடைகாக்கும் படிநிலைகளிலும் தட்டுகளை மூட வேண்டும்.