Test rapido combinato per gli antigeni di COVID-19 e influenza di tipo A/B (tampone nasofaringeo)

Il test rapido combinato per gli antigeni di COVID-19 e influenza di tipo A/B (tampone nasofaringeo) è un test immunologico cromatografico rapido per la rilevazione qualitativa degli antigeni del virus SARS-CoV-2, dell'influenza A e dell'influenza B da campioni di tampone nasofaringeo di soggetti con sospetta infezione da SARS-CoV-2/influenza, in combinazione con la presentazione clinica e i risultati di altri test di laboratorio. I risultati del test rapido si riferiscono alla rilevazione degli antigeni del SARS-CoV-2 e dell'influenza di tipo A/B. Durante la fase acuta dell'infezione, un antigene risulta generalmente rilevabile nei campioni delle vie respiratorie superiori.

Un risultato positivo indica la presenza di antigeni virali, ma per determinare lo stato dell'infezione è necessaria una correlazione clinica con la storia del paziente e altre informazioni diagnostiche. Un risultato positivo non esclude l'infezione batterica o la co-infezione con altri virus. L'agente rilevato potrebbe non costituire la causa esatta della malattia.

Un risultato negativo non esclude l'infezione da SARS-CoV-2/influenza di tipo A/B e non deve essere utilizzato come unica base per il trattamento o per le decisioni inerenti alla gestione del paziente. Un risultato negativo deve essere considerato come presunto e, se necessario nell’ambito della gestione del paziente, deve essere confermato tramite test molecolare. Un risultato negativo deve essere considerato alla luce delle recenti esposizioni, dell'anamnesi e della presenza nel paziente di segnali e di sintomi clinici riconducibili a COVID-19 o ad influenza di tipo A/B. Il test rapido combinato per gli antigeni di COVID-19 e influenza di tipo A/B è destinato all'uso da parte di personale esperto di laboratorio clinico.

Portare il test, il campione estratto e/o i controlli a temperatura ambiente (15-30 ° C) prima di iniziare la procedura.

1. Rimuovere il test a cassetta dalla busta di alluminio sigillata e usarlo entro un'ora. I migliori risultati si ottengono infatti se il test viene eseguito immediatamente dopo l'apertura della busta di alluminio.
   2. Capovolgere la provetta di estrazione del campione e aggiungere 3 gocce di campione estratto (circa 100μl) a ciascuno dei pozzetti del campione, quindi avviare il timer.
   3. Attendere che compaiano le linee colorate. Leggere il risultato dopo 15 minuti. Non interpretare i risultati dopo 20 minuti.

Figura 1: I passi da seguire per l’utilizzo del test rapido combinato per gli antigeni di COVID-19 e influenza di tipo A/B

Il test rapido combinato per gli antigeni di COVID-19 e influenza di tipo A/B (tampone nasofaringeo) è stato valutato tramite campioni ottenuti dai pazienti. La tecnica RT-PCR è utilizzata come metodo di riferimento per il test rapido: i campioni sono stati considerati positivi se il metodo RT-PCR ha indicato un risultato positivo, mentre sono stati considerati negativi se la RT-PCR ha indicato un risultato negativo.

*Intervalli di confidenza

*Intervalli di confidenza

I nuovi coronavirus appartengono al genere β. Il COVID-19 è una malattia infettiva respiratoria acuta; le persone ne sono generalmente suscettibili. Attualmente, i pazienti infettati dal nuovo coronavirus costituiscono la principale fonte di infezione; anche le persone infette asintomatiche possono rappresentare una sorgente infettiva. Le manifestazioni principali includono febbre, stanchezza e tosse secca; in alcuni casi si riscontrano congestione nasale, naso che cola, mal di gola, mialgia e diarrea. L'influenza è invece un'infezione virale acuta e altamente contagiosa delle vie respiratorie, una malattia trasmissibile facilmente attraverso la tosse e gli starnuti di goccioline nebulizzate contenenti virus vivo. I focolai di influenza si verificano ogni anno durante i mesi autunnali e invernali.

I virus di tipo A sono tipicamente più diffusi di quelli di tipo B e sono associati alle epidemie di influenza più gravi, mentre le infezioni di tipo B sono generalmente più lievi. Il sistema principale a livello di diagnosi di laboratorio è la coltura cellulare di 14 giorni attraverso una varietà di linee cellulari in grado di supportare la crescita del virus dell'influenza. La coltura cellulare ha un'utilità clinica limitata, poiché i risultati vengono ottenuti troppo tardi nel decorso clinico per poter determinare un intervento efficace sul paziente. La reazione a catena della polimerasi-trascrittasi inversa (RT-PCR) è un metodo più recente e generalmente più sensibile rispetto alla coltura, con tassi di rilevamento migliori del 2-23%; tuttavia, la RT-PCR è costosa, complessa e deve essere eseguita in laboratori specializzati

Il test rapido dell'antigene COVID-19 (tampone nasofaringeo) è un test immunologico qualitativo basato su membrana per la rilevazione degli antigeni del SARS-CoV-2 nei campioni di tampone nasofaringeo umano. L'anticorpo del SARS-CoV-2 è rivestito di una zona reattiva. Durante il test, il campione reagisce con le particelle rivestite di anticorpo del SARS-CoV-2; la miscela quindi migra verso l'alto sulla membrana tramite azione capillare e reagisce con l'anticorpo del SARS-CoV-2 nella zona reattiva. Se il campione contiene antigeni di SARS-CoV-2, apparirà una linea colorata nella zona reattiva; se il campione non contiene antigeni, non apparirà alcuna linea colorata nella zona reattiva, indicando un risultato negativo. Come controllo procedurale, apparirà sempre una linea colorata nella regione della linea di controllo, indicando che è stato aggiunto il volume appropriato di campione e che si è verificato il drenaggio della membrana.

Il test rapido per l'influenza di tipo A/B (tampone nasofaringeo) è un test immunologico qualitativo a flusso laterale per la rilevazione dell'antigene dell'influenza A e dell'influenza B nei campioni di tampone nasofaringeo umano; in questo test, l'anticorpo specifico per l'influenza A e per l'influenza B è rivestito separatamente sulle zone reattive del test. Durante la procedura il campione estratto reagisce con l'anticorpo dell'influenza A e/o B depositato sulle particelle; la miscela migra lungo la membrana per reagire con l'anticorpo e genera una oppure due linee colorate nelle zone reattive. La presenza di questa linea colorata in una o in entrambe le aree del test indica un risultato positivo. Come controllo procedurale, apparirà sempre una linea colorata nella regione della linea di controllo nel caso in cui il test sia stato eseguito correttamente.

Il test contiene anticorpi anti-SARS-COV-2, anti-Influenza A e anti-Influenza B come reagenti di cattura, anticorpi anti-SARS-COV-2, anti-Influenza A e anti-Influenza B come reagenti di rilevamento.

Conservare come confezionato nella busta sigillata a temperatura ambiente o refrigerato (2-30° C). Il test è stabile fino alla data di scadenza stampata sulla busta sigillata. Il test deve rimanere nella busta sigillata fino al momento dell'uso. NON CONGELARE. Non utilizzare oltre la data di scadenza.

1. Inserire un tampone sterile nella narice del paziente, raggiungendo la superficie rinofaringea posteriore.
   2. Tamponare la superficie rinofaringea posteriore.
   3. Prelevare il tampone sterile dalla cavità nasale.

Figura 2: Rappresentazione schematica della raccolta di un campione

I campioni devono essere testati il ​​prima possibile dopo la raccolta.

Se i tamponi non vengono elaborati immediatamente, si consiglia vivamente di inserire il campione del tampone in una provetta di plastica asciutta, sterile e ben sigillata per la conservazione. Il campione prelevato, in condizioni asciutte e sterili, è stabile fino a 8 ore a temperatura ambiente e fino a 24 ore ad una temperatura compresa fra i 2 e gli 8°C.

Non conservare i campioni nei mezzi di trasporto virale

Preparazione del campione

Preparazione con tampone di estrazione e provetta di estrazione integrata

Solo il tampone di estrazione e le provette forniti nel kit devono essere utilizzati per la preparazione dei campioni su tampone.

1. Svitare il tappo della provetta di estrazione con il tampone di estrazione.
   2. Inserire il campione col tampone nella provetta di estrazione; premere contro la parete interna della provetta e agitare il tampone per circa 10 secondi premendo la testa del tampone contro la parete interna della provetta per rilasciare gli antigeni nella provetta.
   3. Rimuovere il tampone stringendo i lati della provetta per estrarre il liquido dal tampone.
   4. Stringere il tappo sulla provetta di estrazione del campione.

Solo il tampone di estrazione e le provette forniti nel kit devono essere utilizzati per la preparazione dei campioni su tampone.

1. Svitare il tappo della provetta di estrazione con il tampone di estrazione.
   2. Inserire il campione col tampone nella provetta di estrazione; premere contro la parete interna della provetta e agitare il tampone per circa 10 secondi premendo la testa del tampone contro la parete interna della provetta per rilasciare gli antigeni nella provetta.
   3. Rimuovere il tampone stringendo i lati della provetta per estrarre il liquido dal tampone.
   4. Stringere il tappo sulla provetta di estrazione del campione.

Figura 3: rappresentazione schematica della preparazione di un campione

1. Posizionare la provetta di estrazione nella postazione di lavoro. Aggiungere circa 350μl dal tampone di estrazione nella provetta.
   2. Posizionare il campione col tampone nella provetta di estrazione. Ruotare il tampone per circa 10 secondi premendo la testa del tampone contro l'interno della provetta per rilasciare l'antigene nel contenuto nel tampone.
   3. Rimuovere il tampone premendo la testa del tampone contro l'interno della provetta di estrazione al fine di espellere quanto più liquido possibile dal tampone. Gettare via il tampone in conformità al protocollo di smaltimento dei rifiuti a rischio biologico.
   4. Posizionare la punta del contagocce sulla parte superiore del tubo di estrazione.

Figura 4: rappresentazione schematica della preparazione con tampone di estrazione

*N.B.: la conservazione del campione dopo l'estrazione è stabile per 2 ore a temperatura ambiente oppure per 24 ore a 2-8°C.

Quando si utilizza il mezzo di trasporto virale (VTM), è importante assicurarsi che il VTM contenente il campione sia portato a temperatura ambiente (15-30°C). Utilizzando una pipetta, trasferire 350μl di soluzione campione dal VTM alle provette di estrazione campioni con tampone di estrazione, dunque mescolare bene agitando.

* N.B.: la conservazione del campione dopo l'estrazione è stabile per 2 ore a temperatura ambiente oppure per 24 ore a 2-8°C.

Controllo di qualità interno
I controlli procedurali interni sono inclusi nel test. Una linea colorata che appare nella zona di controllo (C) rappresenta un controllo procedurale interno positivo; esso serve a confermare un volume di campione sufficiente e una tecnica procedurale corretta. Uno sfondo chiaro rappresenta invece un controllo procedurale interno negativo. Se il test funziona correttamente, lo sfondo nell'area dei risultati dovrebbe essere di colore da bianco a rosa chiaro e non dovrebbe interferire con la capacità di leggere i risultati del test.

Controllo di qualità esterno
I controlli non sono inclusi in questo kit. Tuttavia, in conformità con le buone pratiche di laboratorio (GLP), si raccomandano controlli positivo/negativo.

Sebbene riteniamo che questo kit sia un indicatore efficace di infezione, non è possibile garantire una precisione del 100%, dunque si consiglia in ogni caso ai pazienti di seguire le linee guida del proprio governo per coloro che presentano sintomi e che non riguardano l'igiene, l'autoisolamento e altre misure, anche qualora il test risulti negativo.  

• I risultati negativi non escludono l'infezione da SARS-CoV-2, in particolare per coloro che sono stati a contatto con il virus. Per escludere l'infezione in questi individui, si consiglia di effettuare test di follow-up tramite diagnostica molecolare.
• I risultati del test anticorpale non devono essere utilizzati come unica base per diagnosticare o escludere l'infezione da SARS-CoV-2 oppure per avere informazioni sullo stato dell'infezione.
• I risultati positivi possono essere dovuti a infezioni passate o presenti con ceppi di coronavirus non SARS-CoV-2, come i coronavirus HKU1, NL63, OC43 o 229E.
• Questo kit è solo ad uso professionale.