1简介

以下为配制蛋白质印迹（Western blot）缓冲液所需的全部材料，包括封闭缓冲液、Lammeli 缓冲液、上样缓冲液、运行缓冲液、转移缓冲液与剥离缓冲液等。

蛋白质印迹是一种用于确定样品中是否存在所选蛋白质的技术。首先，通过凝胶电泳依据分子大小分离蛋白质；随后利用电流将蛋白质转移到膜上（通常为硝酸纤维素膜或 PVDF 膜）。然后用对目标蛋白质具有特异性的抗体对膜进行染色，从而获取有关蛋白质的定性或半定量信息。

2缓冲液与配方

2.1 封闭缓冲液

• TBST 中的 5% Marvel（脱脂奶粉）

2.2 Lammeli 缓冲液配方

• 4% SDS
• 10% 2-巯基乙醇
• 20% 甘油
• 0.004% 溴酚蓝
• 0.125 M Tris-HCl

2.3 上样缓冲液配方

• 2X 上样缓冲液
• 100 mM Tris-HCl（pH 6.8）
• 200 mM DTT
• 4% SDS
• 0.2% 溴酚蓝
• 20% 甘油

2.4 NP-40 缓冲液配方

• 150 mM 氯化钠（NaCl）
• 1.0% NP-40（可用 Triton X-100 代替 NP-40）
• 50 mM Tris，pH 8.0

2.5 分离凝胶配方

• H₂O 5.9 ml
• 30% 丙烯酰胺-双丙烯酰胺 5 ml
• 1.5 M Tris，pH 8.8　3.8 ml
• 10% SDS　150 µl
• 10% APS　150 µl
• TEMED　6 µl

2.6 RIPA 缓冲液配方

• 50 mM Tris-HCl，pH 7.4
• 50 mM NaCl
• 2 mM EDTA
• 1% SDS

2.7 运行缓冲液配方

• 15.1 g TRIZMA
• 94 g 甘氨酸
• 50 ml 10% (w/v) SDS
• 加 dH₂O 至 1 升

2.8 Tris-HCl 缓冲液

• 20 mM Tris-HCl，pH 7.0

2.9 Tris-Triton 缓冲液

• 10 mM Tris，pH 7.4
• 100 mM NaCl
• 1 mM EDTA
• 1 mM EGTA
• 1% Triton X-100
• 10% 甘油
• 1% SDS
• 5% 脱氧胆酸盐

2.10 堆积凝胶配方

• H₂O 2.7 ml
• 丙烯酰胺-Bis 670 µl
• Tris，pH 6.8　500 µl
• 10% SDS　40 µl
• 10% APS　40 µl
• TEMED　3 µl

2.11 剥离缓冲液

• 62.5 mM Tris-HCl，pH 7.8
• 100 mM 2-巯基乙醇
• 2% (w/v) SDS

2.12 TBS-T 配方

• 20 mM Tris，pH 7.5
• 150 mM NaCl
• 0.1% Tween 20

2.13 转移缓冲液配方

• 8 g Trizma 碱
• 9 g 甘氨酸
• 37 g SDS 粉末
• 200 ml 甲醇
• 加 dH₂O 至 1 升