IHC Buffers & Recipes - Mandarin
免疫组织化学 缓冲液与配方
以下概述了免疫组织化学缓冲液和配方的选择，包括：固定缓冲液、热诱导表位修复（HIER）缓冲液、酶检测缓冲液、渗透和封闭缓冲液。
固定缓冲液样品
Zenker氏溶液
用Zenker氏溶液处理血样，如脾脏和结缔组织。
| 试剂 | 剂量 |
|
氯化汞 |
5 g
|
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重铬酸钾 |
2.5 g
|
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ddH20 |
100 ml
|
*加热和冷却。使用前加入5mL冰醋酸。处理固定在Zenker氏溶液中的组织时，切勿使用金属镊子。
Helly氏溶液
Helly氏溶液可用于骨髓、肝、脾等造血器官。
| 试剂 | 剂量 |
|
氯化汞 |
5 g
|
|
重铬酸钾 |
2.5 g
|
|
ddH20 |
100 ml
|
*加热和冷却。使用前加入5mL甲醛。
Bouin氏固定液
当需要保留软组织结构时，应使用Bouin氏固定液。
| 试剂 | 剂量 |
|
苦味酸（饱和） |
75 ml
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甲醛（37-40%） |
25 ml
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冰醋酸 |
5 ml
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Carnoy氏溶液
Carnoy氏溶液应用于DNA和RNA的固定。
| 试剂 | 剂量 |
|
乙醇（100%） |
60 ml
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氯仿 |
30 ml
|
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冰醋酸 |
10 ml
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福尔马林锌
- 制作0.1M Tris缓冲液，pH 7.4
| 试剂 | 剂量 |
|
Trizma Tris碱 |
12.1 g
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1N HCL
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81.5 ml
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ddH20 |
900 ml
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2. 准备锌固定液
| 试剂 | 剂量 |
|
醋酸钙 |
0.5 g
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醋酸锌 |
5.0 g
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氯化锌 |
5.0 g
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0.1M Tris缓冲液（见上文） |
1000 ml
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*搅拌溶解。调整最终pH值至6.5-7.0。在室温下保存。
4%甲醛固定液
- 制作2M 磷酸盐缓冲液，pH 7.4
| 试剂 | 剂量 |
|
NaHPO
|
21.8 g
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NaHPO
|
6.4 g
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|
ddH20 |
1000ml
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2. 由此制作1M 磷酸盐缓冲液，pH 7.4
| 试剂 | 剂量 |
|
0.2M PB
|
500 ml
|
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ddH2-
|
500ml
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3. 继续在1M 磷酸盐缓冲液中制作4%多聚甲醛。
| 试剂 | 剂量 |
|
聚甲醛 |
40 g
|
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0.1M 磷酸盐缓冲液 |
1000 ml
|
*一边搅拌一边加热至60-65℃。加入几滴1N NaOH，直到溶液清澈。继续搅拌，直到溶液溶解。冷却并过滤。
10%中性缓冲福尔马林
| 试剂 | 剂量 |
|
福尔马林（37-40%的原液） |
100ml
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ddH20 |
900ml
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NaH2PO4 （单碱基） |
4g/L
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Na2HPO4 （二盐基/无水） |
6.5g/L
|
*10%福尔马林占37-40%原液的10%。因此，10%福尔马林中溶解的甲醛实际含量仅为3.7-4.0%。
用于热诱导表位修复（HIER）的缓冲剂
柠檬酸钠缓冲液（10mM 柠檬酸钠，0.05%Tween20，pH6.0）
| 试剂 | 剂量 |
|
柠檬酸三钠（二水） |
2.94 g
|
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ddH20 |
1000 ml
|
|
Tween 20
|
0.5 ml
|
*用1N HCL调整pH值至6.0。在室温下可保存3个月，如需长时间保存，请在4℃下保存。
1 mM EDTA, pH 8.0
| 试剂 | 剂量 |
|
EDTA
|
0.37 g
|
|
ddH20 |
1 L
|
*用NaOH调节pH值至8.0，室温下保存3个月。
Tris-EDTA缓冲液（10mM Tris碱，1mM EDTA溶液，0.05% Tween20，pH 9.0）。
| 试剂 | 剂量 |
|
Tris
|
1.21 g
|
|
EDTA
|
0.37 g
|
|
ddH20 |
1000 ml
|
|
Tween 20
|
0.5 ml
|
*调整pH值至9.0。在室温下可保存3个月，如需长时间保存，请在4ºC下保存。
酶法抗原修复缓冲液
胰蛋白酶缓冲液
- 制作胰蛋白酶原液（0.05%）
| 试剂 | 剂量 |
|
胰蛋白酶 |
50 mg
|
|
ddH20 |
1000 ml
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*在-20℃下保存
- 制作1%氯化钙原液
| 试剂 | 剂量 |
|
氯化钙 |
0.1 g
|
|
ddH20
|
1000 ml
|
*在4℃下保存
- 胰蛋白酶工作液（0.05%)
| 试剂 | 剂量 |
|
胰蛋白酶原液（0.05%） |
1 ml
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钙镁合金溶液（1%） |
1 ml
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蒸馏水 |
8 ml
|
*用NaOH调整pH值至7.8，在4℃下保存一个月，在-20℃下长期保存。
渗透缓冲液
Triton或 NP-40
在PBS中使用0.1 - 0.2 %仅10分钟
*部分溶解核膜进行核抗原染色。
Tween20、皂素、二肽和亮光素
使用0.2-0.5%，10-30分钟
*适用于细胞质抗原和可溶性核抗原。
封闭缓冲液
过氧化物酶封闭液（PBS中3% H202）
| 试剂 | 剂量 |
|
30% H2O2 |
10 ml
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1X PBS
|
90 ml
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*在4℃下保存，可保存3个月。推荐用于石蜡切片的溶液。
过氧化物酶封闭液（甲醇中0.3%H2O2）
| 试剂 | 剂量 |
|
30% H2O2 |
1 ml
|
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甲醇 |
99 ml
|
*在4℃下保存。推荐用于冷冻切片。
生物素封闭缓冲液
PBS中0.001%生物素
*在4℃下保存。
封闭血清样品缓冲液配方
正常兔血清封闭缓冲液
| 试剂 | 剂量 |
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兔血清 |
2%
|
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BSA
|
1%
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冷鱼皮胶 |
0.1%
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Triton X-100
|
0.1%
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Tween 20
|
0.05%
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叠氮化钠 |
0.05%
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1M PBS, pH 7.2
|
*在4℃下保存
通用封闭缓冲液
| 试剂 | 剂量 |
|
BSA
|
1%
|
|
冷鱼皮胶 |
0.1%
|
|
Triton X-100
|
0.5%
|
|
叠氮化钠 |
0.05%
|
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0.01M PBS, pH 7.2-7.4
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*在4℃下保存。因为是HRP的抑制剂，不要用叠氮化钠来稀释HRP结合抗体。