IHC Buffers & Recipes - Mandarin
1简介
以下概述了免疫组织化学（IHC）缓冲液和配方的选择，包括：固定缓冲液、热诱导表位修复（HIER）缓冲液、酶检测缓冲液、渗透与封闭缓冲液。
2固定缓冲液样品
2.1 Zenker氏溶液
用 Zenker 氏溶液处理血样，如脾脏和结缔组织。
- 氯化汞 — 5 g
- 重铬酸钾 — 2.5 g
- ddH2O — 100 ml
加热和冷却。使用前加入 5 mL 冰醋酸。
注意事项
- 处理固定在 Zenker 氏溶液中的组织时，切勿使用金属镊子。
2.2 Helly氏溶液
Helly 氏溶液可用于骨髓、肝、脾等造血器官。
- 氯化汞 — 5 g
- 重铬酸钾 — 2.5 g
- ddH2O — 100 ml
加热和冷却。使用前加入 5 mL 甲醛。
2.3 Bouin氏固定液
当需要保留软组织结构时，应使用 Bouin 氏固定液。
- 苦味酸（饱和） — 75 ml
- 甲醛（37–40%） — 25 ml
- 冰醋酸 — 5 ml
2.4 Carnoy氏溶液
Carnoy 氏溶液应用于 DNA 和 RNA 的固定。
- 乙醇（100%） — 60 ml
- 氯仿 — 30 ml
- 冰醋酸 — 10 ml
2.5 福尔马林锌
1. 制作 0.1M Tris 缓冲液，pH 7.4
- Trizma Tris 碱 — 12.1 g
- 1N HCl — 81.5 ml
- ddH2O — 900 ml
2. 准备锌固定液
- 醋酸钙 — 0.5 g
- 醋酸锌 — 5.0 g
- 氯化锌 — 5.0 g
- 0.1M Tris 缓冲液（见上文） — 1000 ml
搅拌溶解。调整最终 pH 值至 6.5–7.0。在室温下保存。
2.6 4%甲醛固定液
1. 制作 2M 磷酸盐缓冲液，pH 7.4
- NaH2PO4 — 21.8 g
- Na2HPO4 — 6.4 g
- ddH2O — 1000 ml
2. 由此制作 1M 磷酸盐缓冲液，pH 7.4
- 0.2M PB — 500 ml
- ddH2O — 500 ml
3. 继续在 1M 磷酸盐缓冲液中制作 4% 多聚甲醛
- 聚甲醛 — 40 g
- 0.1M 磷酸盐缓冲液 — 1000 ml
一边搅拌一边加热至 60–65℃。加入几滴 1N NaOH，直到溶液清澈。继续搅拌，直到溶液溶解。冷却并过滤。
2.7 10%中性缓冲福尔马林
- 福尔马林（37–40% 的原液） — 100 ml
- ddH2O — 900 ml
- NaH2PO4（单碱基） — 4 g/L
- Na2HPO4（二盐基/无水） — 6.5 g/L
10% 福尔马林占 37–40% 原液的 10%。因此，10% 福尔马林中溶解的甲醛实际含量仅为 3.7–4.0%。
3用于热诱导表位修复（HIER）的缓冲剂
3.1 柠檬酸钠缓冲液（10mM 柠檬酸钠，0.05% Tween 20，pH 6.0）
- 柠檬酸三钠（二水） — 2.94 g
- ddH2O — 1000 ml
- Tween 20 — 0.5 ml
用 1N HCl 调整 pH 值至 6.0。在室温下可保存 3 个月，如需长时间保存，请在 4℃ 下保存。
3.2 1 mM EDTA，pH 8.0
- EDTA — 0.37 g
- ddH2O — 1 L
用 NaOH 调节 pH 值至 8.0，室温下保存 3 个月。
3.3 Tris-EDTA 缓冲液（10mM Tris 碱，1mM EDTA，0.05% Tween 20，pH 9.0）
- Tris — 1.21 g
- EDTA — 0.37 g
- ddH2O — 1000 ml
- Tween 20 — 0.5 ml
调整 pH 值至 9.0。在室温下可保存 3 个月，如需长时间保存，请在 4℃ 下保存。
4酶法抗原修复缓冲液
4.1 胰蛋白酶缓冲液
1. 制作胰蛋白酶原液（0.05%）
- 胰蛋白酶 — 50 mg
- ddH2O — 1000 ml
在 –20℃ 下保存。
2. 制作 1% 氯化钙原液
- 氯化钙 — 0.1 g
- ddH2O — 1000 ml
在 4℃ 下保存。
3. 胰蛋白酶工作液（0.05%）
- 胰蛋白酶原液（0.05%） — 1 ml
- 氯化钙溶液（1%） — 1 ml
- 蒸馏水 — 8 ml
用 NaOH 调整 pH 值至 7.8，在 4℃ 下保存一个月，在 –20℃ 下长期保存。
5渗透缓冲液
5.1 Triton 或 NP-40
在 PBS 中使用 0.1–0.2%，仅 10 分钟。
部分溶解核膜进行核抗原染色。
5.2 Tween 20、皂素、洋地黄皂苷与亮抑酶肽
使用 0.2–0.5%，10–30 分钟。
适用于细胞质抗原和可溶性核抗原。
6封闭缓冲液
6.1 过氧化物酶封闭液（PBS 中 3% H2O2）
- 30% H2O2 — 10 ml
- 1X PBS — 90 ml
在 4℃ 下保存，可保存 3 个月。推荐用于石蜡切片的溶液。
6.2 过氧化物酶封闭液（甲醇中 0.3% H2O2）
- 30% H2O2 — 1 ml
- 甲醇 — 99 ml
在 4℃ 下保存。推荐用于冷冻切片。
6.3 生物素封闭缓冲液
PBS 中 0.001% 生物素。
在 4℃ 下保存。
7封闭血清样品缓冲液配方
7.1 正常兔血清封闭缓冲液
- 兔血清 — 2%
- BSA — 1%
- 冷鱼皮胶 — 0.1%
- Triton X-100 — 0.1%
- Tween 20 — 0.05%
- 叠氮化钠 — 0.05%
- 1M PBS，pH 7.2 —
在 4℃ 下保存。
7.2 通用封闭缓冲液
- BSA — 1%
- 冷鱼皮胶 — 0.1%
- Triton X-100 — 0.5%
- 叠氮化钠 — 0.05%
- 0.01M PBS，pH 7.2–7.4 —
在 4℃ 下保存。因为是 HRP 的抑制剂，不要用叠氮化钠来稀释 HRP 结合抗体。