1简介

以下是蛋白质印迹（Western blot）中最常用的术语列表，每个术语附有简要解释，便于查阅。

蛋白质印迹是一种用于确定样品中是否存在所选蛋白质的技术。首先，通过凝胶电泳根据大小分离蛋白质；随后利用电流将蛋白质转移到膜上（通常为硝酸纤维素膜或 PVDF 膜）；然后用对目标蛋白质具有特异性的抗体对膜进行染色，从而获取有关该蛋白质的定性或半定量信息。

2样品制备、缓冲液与蛋白质状态

提取缓冲液 —— 也称为裂解缓冲液，用于从细胞中提取蛋白质。

裂解缓冲液 —— 用于从细胞中提取蛋白质。

RIPA 缓冲液 —— RIPA（放射免疫沉淀分析）缓冲液用于裂解并提取培养细胞中的蛋白质。

Lameli 缓冲液 —— Lameli（Laemmli）缓冲液含有 β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT），其作用是在蛋白质采用无规卷曲构型并进而变性之前还原二硫键。除甘油可使样品更致密外，缓冲液中的 SDS 成分还提供凝胶电泳所需的负电荷。

上样缓冲液 —— 例如将 Lameli 缓冲液加入蛋白质中，以实现可视化与凝胶迁移。

洗涤剂 —— 洗涤剂具有独特特性，可破坏生物样品中的疏水-亲水相互作用。

SDS —— 十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子洗涤剂，可使蛋白质部分变性并覆盖其表面。

变性 —— 蛋白质丧失其四级、三级和二级结构的过程。

二硫键 —— 二硫键是由两个巯基衍生而来的共价键，可帮助氧化后蛋白质的折叠。

天然蛋白质 —— 蛋白质的天然状态是指处于适当折叠状态且具有功能活性的蛋白质。

3凝胶电泳与聚合

凝胶电泳 —— 用于根据分子大小分离 DNA、RNA 或蛋白质的混合物。

SDS-PAGE 凝胶电泳 —— 使用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，并使用 SDS 使蛋白质变性。

分离凝胶 —— 分离凝胶是凝胶的底部及较大部分，最先被倒入。

堆积凝胶 —— 将堆积凝胶倒在分离凝胶之上，并将梳子插入其中。堆积凝胶用于将所有蛋白质集中/压缩为一条带，使它们能同时开始在分离凝胶中迁移。

APS —— 过硫酸铵。APS 引发丙烯酰胺混合物的聚合，提供聚合所必需的自由基。

TEMED —— TEMED 充当催化剂以加速凝胶的聚合反应；加入 TEMED 后应立即倒胶。

Tris —— Tris 是调节凝胶 pH 值的首选缓冲液。堆积缓冲液的 pH 通常为 6.8，分离凝胶的 pH 为 8.8。

阴离子 —— 带负电的离子，在电解中被吸引至阳极。

阴极 —— 阴极是带负电的电极，可作为电子源或电子供体。

离子 —— 在离子键合中，原子相互转移电子。离子键需要至少一个电子给体与一个电子受体。

4转移与膜

转移 —— 指将分离后的蛋白质转移到待探测的膜上，并测定样品中蛋白质的量。

硝酸纤维素膜 —— 用于蛋白质印迹转移的膜，具有高蛋白结合亲和力，并与多种检测方法兼容。蛋白质通过疏水相互作用固定于膜上。

PVDF —— 聚偏二氟乙烯（PVDF）是由偏二氟乙烯聚合而成的高非反应性热塑性含氟聚合物，对氨基酸无特异性亲和力。

封闭 —— 对蛋白质印迹膜进行封闭，以防止非特异性结合。

5抗体、检测与定量

一抗 —— 一抗是一种免疫球蛋白，可与目标蛋白质特异性结合，用于纯化或检测并测量该蛋白质。

二抗 —— 二抗结合一抗，从而实现对靶抗原的检测与纯化。二抗必须对所用一抗的抗体种属与同种型具有特异性，且通常会偶联标记以实现化学发光或荧光检测。

探测 —— 用于鉴定并定量二抗与一抗的结合，进而确定样品中蛋白质的量。

化学发光 —— 化学发光是化学反应产生的光。两种化学物质反应形成受激的中间体，该中间体分解回到基态时释放能量，成为光子。

ECL —— 增强型化学发光。在使用 HRP 标记抗体时应用，加入化学发光底物（如鲁米诺）与氧化剂（如 H₂O₂），二者形成受激中间体并在 540 nm 处发射。

荧光团 —— 激发时可以发光的荧光化合物。

表位 —— 抗原中被免疫系统识别的一部分。

非特异性结合 —— 指配体与其指定受体以外的物质发生的结合。

物种特有性 —— 指抗体或药物的作用仅限于特定物种。

BCA —— 二辛可宁酸测定法。一种生化光谱法，用于测定溶液中蛋白质的总浓度。

Bradford 测定法 —— 一种光谱蛋白质测定法，用于测量溶液中蛋白质的浓度，其结果取决于所测蛋白质的氨基酸组成。

定性分析 —— 有助于确定被测分析物存在与否。

定量分析 —— 可测量分析物的存在、数量或功能活性。

半定量 —— 产生物质数量或量的近似值，介于定性与定量结果之间。