マルチプレックスELISAキット
マルチプレックス ELISA キット（GeniePlex）
わずか 15 µL のサンプルから最大 24 因子を同時測定できる GeniePlex マルチプレックス ELISA。原理・パネル・詳細プロトコル・トラブルシューティングまでを日本語でまとめた総合ガイドです。
← 日本語リソースへ戻る1GeniePlex マルチプレックス ELISA とは
GeniePlex はビーズベースのマルチプレックスイムノアッセイ技術です。わずか 15 µL のサンプルから最大 24 因子を同時・定量的に測定でき、既存のフローサイトメーターで実行できるため高額な専用機器の購入は不要です。
- フローサイトメトリーで最大 24 因子を測定
- わずか 15 µL のサンプルで測定可能
- ヒト・マウス・ラット・イヌ・非ヒト霊長類向けのプレミックスパネル
- ご希望のカスタムパネルも作成可能
2アッセイ原理
ELISA の代替として、単一サンプル内で複数因子を同時に定量する抗体ベースのアッセイがマルチプレックスアッセイです。特定の因子に対する抗体がビーズに結合し、蛍光レポーターを持つ検出抗体を加えます。各ビーズセットは蛍光特性で識別され、フローサイトメーターで複数検体を同時に検出・定量できます。
ヒトサイトカイン マルチプレックスアッセイは、サイズと蛍光強度で分けられた複数のビーズ集団を利用します。ビーズは 488 nm シングル、または 488 nm と 633/640 nm のデュアルレーザーで測定します（判別用の最大蛍光波長 700 nm）。
原理はサンドイッチ ELISA に似ています。ビーズ上の捕捉抗体が対象タンパク質を捕捉し、別エピトープを認識するビオチン標識抗体で挟み込み、ストレプトアビジン-フィコエリスリン（PE）と反応させ、ビーズ上の PE 蛍光強度を数値化します。濃度は既知濃度の標準曲線との比較で求めます。アッセイは抗原捕捉（60 分）、ビオチン標識抗体（30 分）、ストレプトアビジン PE（20 分）のインキュベーションからなります。
3特徴と利点
- 1 サンプルあたり 2〜24 検体を同時測定
- 2 時間のプロトコル
- 各検体 10 pg/mL 以下の高感度・広い測定範囲（下限 < 20、上限 > 5,000 pg/mL）
- アッセイ内 CV < 10%、アッセイ間 CV < 20%
- わずか 15 µL の少量サンプル
- 全アッセイで交差反応性を確認済み
4GeniePlex と ELISA の比較
GeniePlex は Luminex（xMAP）技術と優れた相関を示し、ヒト PBMC 培養上清サンプルでの比較でも同等以上のパフォーマンスが確認されています。従来の ELISA と比べても、少量サンプルで多因子を効率的に測定できます。
| GeniePlex | ELISA | |
|---|---|---|
| サンプル量 | 15 µL | 50〜700 µL |
| 96 ウェルプレート | 1 プレート | 7 プレート |
| 所要時間 | 約 4 時間 | 約 4〜7 時間 |
| 測定範囲 | 2〜5,000 pg/mL | 2〜1,500 pg/mL |
5パネルを探す（400+ 検体）
ヒト・マウス・ラット・非ヒト霊長類・イヌ向けに 400 点近いアッセイをご用意しています。目的別のプレミックスパネルからお選びください。
ヒト パネル
マウス パネル
ラット・非ヒト霊長類・イヌ パネル
6プロトコル
- フィルタープレートのテンプレートを準備し、スタンダード・サンプル・ブランクウェルをマークします（2〜3 反復）。使用しないウェルはシールで封をします。重要：プレート底面が触れないよう、フタの上部に置きます。
- ビーズ懸濁液を 15 秒間ボルテックスします。
- 捕捉ビーズ懸濁液を各ウェルに 45 µL ずつ添加します（残りは遮光して 2〜8℃ で保管、セットアップに使用可）。
- 真空源に接続した flow-through 式フィルタープレートウォッシャーでウェル内のバッファーを除去します。
- プレート底面をペーパータオルに軽くタップして残留バッファーを除きます。
- アッセイバッファー 30 µL を各サンプルウェルに添加します（20 pg/mL 未満が見込まれる細胞培養上清では省略し、次のステップでサンプル 45 µL を添加）。
- サンプル 15 µL を各サンプルウェルに、スタンダード 45 µL を各スタンダードウェルに添加し、シールで覆います。
- シェーカー（700 rpm）で室温 60 分間インキュベートします（アルミホイルで遮光）。
- シールをはがし、ウェル内の溶液を除去して 100 µL のウォッシュバッファーで 3 回洗浄します。
- 最後の洗浄後、底面をタップして残留を除きます。
- ビオチン標識抗体溶液 25 µL を各ウェルに添加し、シールで覆います。
- 700 rpm・室温で 30 分間インキュベートします（遮光）。
- シールをはがし、溶液を除去して 100 µL のウォッシュバッファーで 3 回洗浄します。
- 底面をタップして残留を除きます。
- ストレプトアビジン PE 溶液 25 µL を各ウェルに添加し、シールで覆います。
- 700 rpm・室温で 20 分間インキュベートします（遮光）。
- シールをはがし、溶液を除去して 100 µL のウォッシュバッファーで 2 回洗浄します。
- 底面をタップし、ローディング機構に応じて 150〜300 µL のリーディングバッファーでビーズを再懸濁し、シールで覆います。
- マイクロタイターシェーカーで 700 rpm・30 秒間振盪します（200 µL 超が必要な場合は振盪せず、P200 で 6〜8 回ピペッティングして再懸濁しチューブに移す）。
- シールをはがし、フローサイトメーターで解析します。
7トラブルシューティング
カウント数が低い
| 考えられる原因 | 解決法 |
|---|---|
| ビーズの凝集 | ピペッティング前にビーズのストック・ワーキング溶液をボルテックスしてよく混ぜます。 |
| ビーズがウェル底に沈殿 | 測定前に 700 rpm・30 秒間振盪、または P200 で 6〜8 回ピペッティングして再懸濁します。 |
| 真空引きが強すぎる | ウォッシュバッファー 100 µL が 3〜5 秒でなくなるよう真空圧を調整します。 |
シグナル・感度が低い
| 考えられる原因 | 解決法 |
|---|---|
| スタンダードの再構成不良 | 希釈液を加えた後、氷上で 5 分間インキュベートします。 |
| インキュベーション時間が短い | 各ステップの推奨時間に従います。 |
| 光への過剰曝露 | インキュベーション中はプレートをアルミホイルで覆います。 |
高バックグラウンド・低精度・目詰まり
| 考えられる原因 | 解決法 |
|---|---|
| ウェル間の汚染 | 移し替えごとにチップを交換し、シールは慎重に外して内容物が混ざらないようにします。 |
| ピペッティング精度が不十分 | 校正済みのピペットを使用します。 |
| 脂質含量が高くフィルターが目詰まり | サンプルを 10,000 × g・2〜8℃ で 10 分間遠心し、上清画分を回収します。 |
8関連する日本語ガイド
マルチプレックス・ELISA ワークフローに役立つ、その他の日本語ガイドもあわせてご覧ください。