ELISA プレートのクリーニングのヒント
ELISA プレート洗浄のヒント
ELISA プレートの洗浄を最適化してデータ品質を向上させるための実践的なヒント。洗浄が重要な理由から、バッファー量・洗浄回数・吸引のコツまでを日本語でまとめました。
← 日本語リソースへ戻る1ELISA プレートの洗浄方法
以下のヒントは、ELISA プレートの洗浄を最適化してデータ品質を向上させるのに役立ちます。ELISA は抗体を利用してサンプル中の因子を定量する手法で、免疫学・神経科学・がん研究で広く使われ、炎症・成長因子・シグナル分子（IL-6、IL-8、BDNF、VEGF など）を分析します。
2ELISA の種類
ELISA には主にサンドイッチ ELISA（抗体がプレートに結合）と競合 ELISA（抗原がプレートに結合）の 2 タイプがあり、いずれも 2 つの主要な抗体結合ステップを含みます。その過程で、不要な因子・未結合抗体・低親和性複合体を除去する洗浄ステップが重要になります。
3TMB 反応
ELISA では比色・化学発光・蛍光の 3 つの検出技術があり、一般には比色分析が用いられます。基質 TMB（3,3′,5,5′-テトラメチルベンジジン）は、西洋わさびペルオキシダーゼ（HRP）の存在下で過酸化水素を還元する水素供与体として働き、溶液を青色に変える diimine を生成します（370・650 nm で測定可能）。硫酸を加えて反応を停止すると黄色に変わり、450 nm で測定します。
4洗浄が重要な理由
洗浄はバックグラウンドシグナルを下げるうえで極めて重要です。洗浄が不十分だと未反応の標識抗体が残り、S/N 比が悪化してサンプル間のばらつきが増え、結果に悪影響を及ぼします。適切な洗浄により、抗原と反応した抗体のみを検出でき、感度が向上します。
5洗浄バッファーの量
プレートに加える洗浄バッファーの量も重要です。プレートウォッシャーとマルチチャンネルピペットのいずれを使う場合でも、洗浄バッファー量は各ウェルに加えたコーティングバッファー量より多くする必要があります。たとえば 100 µL のコーティングバッファーでコートした場合、ウェルを完全に洗浄するには 200〜350 µL の洗浄バッファーが必要です。
6洗浄回数
洗浄回数も、バックグラウンド低減と、抗原に結合した分析物の過剰な洗い流しの防止の両面で重要です。過剰に洗浄するとシグナルが低下し定量が困難になります。手順書に従い 1 回・3 回・5 回などの洗浄が必要です。一般にプレコートプレートは DIY コートプレートより少ない回数で済みますが、メーカーや技術に依存します。
7洗浄バッファーの吸引（用手法）
洗浄バッファーの吸引は、残留バッファー・不要な複合体・抗体を除去する鍵です。マルチチャンネルピペットを使う場合は洗浄ステップごとに新しいチップを使い、ウェルの側面や底に触れないよう斜めの角度で吸引します。除去後はプレートを裏返し、ペーパータオルで軽くたたいて残液を除きます（プレートを乾燥させないよう注意）。
8関連する日本語ガイド
ELISA ワークフローに役立つ、その他の日本語ガイドもあわせてご覧ください。