血管紧张素转换酶II(ACE2)抑制剂筛选试剂盒

血管紧张素转换酶II(ACE2)活性测定试剂盒(荧光)

血管紧张素转换酶II(ACE2)活性测定试剂盒(荧光)

血管紧张素转化酶II(ACE2,EC 3.4.17.23)是一种基于锌的金属蛋白酶,为肾素-血管紧张素系统(RAS)的一部分,该系统通过裂解血管紧张素IIC端的二肽使之转变为血管紧张素1-7来控制血压调节。ACE2是人类冠状病毒(如SARS和HCoV-NL63)的受体。它在肺、肾和心脏的血管内皮细胞上表达。ACE2是心血管和冠状病毒诱发疾病的潜在治疗靶标。Assay Genie的ACE2活性测定试剂盒将有助于推进该领域的研究。该试剂盒利用活性ACE2的能力来裂解基于合成MCA的肽底物释放游离荧光团。释放的MCA可以使用荧光酶标仪轻松定量。我们也提供ACE2特异性抑制剂,可将ACE2活性与其他蛋白水解活性区分开来,该试剂盒的检测浓度低至0.4 mU。我们的测定试剂盒非常简单,并可以高通量使用。

ACE2活性测定数据

MCA-标准曲线(0-300 pmol),误差带指示SD(n = 3)。
在测定中使用不同量的ACE2阳性对照的动力活性曲线。
ACE2的活性在有ACE2抑制剂情况下(+抑制剂)和无ACE2抑制剂情况下(-抑制剂),在不同类型的鼠组织样品(肺和肾脏中的总蛋白;分别为17 µg和23 µg)和人肾组织样品(总蛋白为10 µg)中进行测量。
在HEK293细胞裂解物中测得激增的ACE2活性和抑制作用(总蛋白:37 µg)。测定按照试剂盒规程进行。

图示:(a) MCA-标准曲线(0-300 pmol),误差带指示SD(n = 3)。(b) 在测定中使用不同量的ACE2阳性对照的动力活性曲线。(c) ACE2的活性在有ACE2抑制剂情况下(+抑制剂)和无ACE2抑制剂情况下(-抑制剂),在不同类型的鼠组织样品(肺和肾脏中的总蛋白;分别为17 µg和23 µg)和人肾组织样品(总蛋白为10 µg)中进行测量。(d) 在HEK293细胞裂解物中测得激增的ACE2活性和抑制作用(总蛋白:37 µg)。测定按照试剂盒规程进行。

ACE2活性测定试剂盒组成

关键信息 说明

产品SKU

BN01071

容量

100次测定

检测方法

荧光(Ex / Em = 320/420 nm)

反应性物种

哺乳动物

应用领域

检测组织/细胞裂解液和酶制剂中ACE2的活性

特性和优点

  • 简单的一步式反应
  • 耗时仅1-2小时
  • 非辐射荧光检测HTP适应性

试剂盒组成

  • ACE2检测缓冲液
  • ACE2稀释缓冲液
  • ACE2裂解缓冲液
  • ACE2阳性对照
  • ACE2底物
  • ACE2抑制剂(22 mM)
  • MCA-标准(1 mM)

储存条件

-20°C

运输条件

凝胶包

使用

仅供研究使用!不适用于人类。

ACE2功能

羧肽酶将血管紧张素I转化为功能未知的肽血管紧张素1-9,并且将血管紧张素II转化为血管扩张剂的血管紧张素1-7(PubMed:10969042, PubMed:10924499, PubMed:11815627)。也能够高效水解apelin-13和dynorphin-13(PubMed:11815627)。血管紧张素II的裂解可能会是心脏功能重要的调节剂(PubMed:10969042, PubMed:10924499)。血管紧张素II的裂解在急性肺损伤中也可能有保护作用(通过相似性原理)。它在肠中充当氨基酸转运蛋白SL6A19的结合伴侣,调节运输,在细胞表面的表达及其催化活性,使其在氨基酸转运中起重要作用(PubMed:18424768, PubMed:19185582)。

ACE2 关键信息

Uniprot

基因名称

ACE2

其他名称

血管紧张素转换酶2、ACE相关的羧肽酶、血管紧张素转换酶同源物、ACEH、金属蛋白酶MPROT15

亚细胞位置

细胞外区域或分泌、细胞膜、细胞质

组织特异性

在大小动脉的内皮细胞和动脉平滑肌细胞中表达(蛋白质水平)(PubMed:15141377)。在肺泡上皮细胞、小肠肠上皮细胞、Leydig细胞和Sertoli细胞中表达(蛋白质水平)(PubMed:15141377)。在肾近端小管和小肠中表达在蛋白质水平)(PubMed:18424768)。在心脏、肾脏、睾丸和胃肠系统中表达(PubMed:10969042, PubMed:10924499, PubMed:15231706, PubMed:12459472, PubMed:15671045)。

感应

心力衰竭中上调

ACE2与冠状病毒

血管紧张素转换酶II(ACE2)已被确定为功能性受体,可促进SARS-CoV-2进入宿主细胞。(来源)ACE2在多种位置和细胞类型中表达,在肺泡上皮细胞、小肠内的表面肠上皮细胞以及心脏和肾脏的内皮细胞上尤其显著。

冠状病毒进入易感细胞是由冠状病毒跨膜“穗状”糖蛋白(通常缩写为“ S”)的S1亚基介导的。(来源)S1在残基318-510处包含一个受体结合域,该域以高亲和力识别并结合ACE2的LYS341残基。(来源)CoV-2的亲和力高于CoV。(来源

对人类ACE2结合亲和力的增加与SARS-CoV先前爆发中的传播效率增加相关。(来源)针对SARS-CoV-2产生的抗体靶向S2亚基,该亚基负责病毒膜和宿主膜的融合。因此,中和S2亚基可抑制病毒进入脆弱细胞。(来源)已发现针对SARS-CoV S蛋白的多克隆抗体可显著削弱SARS-CoV-2通过人类ACE2进入细胞的能力。(来源

ACE 2活性测定试剂盒规程

步骤 程序

样品制备:

使用Dounce匀浆器,用400 µl ACE2裂解缓冲液匀浆组织(〜100 mg)或沉淀的细胞(1-2 x 10 ^ 6),并在冰上放置10分钟。轻轻涡旋10秒钟,再在冰上放置5分钟。在16000 x g,4°C下将匀浆离心10分钟。废置沉淀。

蛋白质浓度测定

将澄清的上清液转移到干净的预冷管中,并保持在冰上。使用BCA蛋白质测定试剂盒(兼容还原剂)测定裂解液或纯化的酶中蛋白质的量

测定步骤:

对于样品(S),将1-5μl裂解物添加到96孔板中的所需孔中。如有必要,用ACE2裂解缓冲液稀释裂解液。对于背景对照(BC),添加相同体积的裂解缓冲液。对于阳性对照(PC),将2 µl稀释的ACE2阳性对照添加到所需的孔中。对于阴性对照(NC),向装有样品和/或ACE2阳性对照的孔中加入2 µl稀释的ACE2抑制剂。用ACE2分析缓冲液将S、BC、NC和PC的体积调节至50μl/孔。混合均匀,在室温下孵育15分钟。

MCA标准曲线绘制准备:

用195 µl ACE2分析缓冲液稀释5 µl 1 mM MCA-Standard来制备25 µM MCA-Standard溶液。将0、2、4、6、8和10 µl的25 µM MCA-Standard加入96孔板的一系列孔中,并使用ACE2分析缓冲液将最终体积调整为100 µl /孔。0、50、100、150、200和250 pmol /孔的MCA标准品将分别产生。充分混合并在终点模式下测量荧光(Ex / Em = 320/420 nm)。

MCA底物混合物:

准备足够数量的试剂以进行多次测定。为每个孔准备50μl底物混合物:

 

  • 48μlACE2测定缓冲液
  • 2μlACE2底物

 

混合并向每个S、BC、PC和NC孔中加入50 µl ACE2底物混合液。混合均匀。
注意:不要将底物混合物添加到标准孔中。

测量:

在室温下以动力模式测量荧光(Ex / Em 320/420 nm)30分钟至2小时。在曲线的线性范围内选择两个时间点(t1和t2),并获得相应的荧光值(RFU1和RFU2)。计算ΔRFU/ΔT。

5th Mar 2020 sean@reagentbio.com BigCommerce

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