کیت غربالگری مهار کننده آنزیم آنژیوتانسین II (ACE2)

کیت غربالگری مهار کننده آنزیم آنژیوتانسین II (ACE2)

آنزیم تبدیل آنژیوتانسین II(ACE2, EC 3.4.17.23)، کربوکسی پپتیداز بخشی از سیستم رنین-آنژیوتانسین است که کنترل فشار خون را با پاک کردن دیپپتید C- ترمینال آنژیوتانسین II کنترل می کند تا آن را به آنژیوتانسین 1-7 تبدیل کند. همچنین ، آنژیوتانسین I را تولید می کند تا عملکرد Ang 1-9 را با عملکرد ناشناخته تولید کند. ACE2 گیرنده انسدادی ویروسهای انسانی مانند SARS و HCoV-NL63 است. در سلولهای اندوتلیال عروقی قلب و کلیه بیان می شود. مهار کننده های ACE2 می توانند فشار خون را با تغییر نفوذپذیری عروقی تنظیم کنند. غربالگری برای مهار کننده های مولکول کوچک و پپتید نیز ممکن است در یافتن درمان به واسطه عفونت کروناویروس کمک کند. کیت غربالگری مهارکننده ارزیابی ژنی ACE2 می تواند برای غربالگری مهار کننده های قوی فعالیت ACE2 استفاده شود، از توانایی ACE2 فعال در برش بستر پپتید مصنوعی مبتنی بر MCA برای رهاسازی فلوروفور آزاد استفاده می شود. MCA منتشر شده را می توان به راحتی با استفاده از دستگاه میکروپلیت فلورسانس اندازه گیری کرد. در حضور یک مهار کننده خاص ACE2 ، آنزیم فعالیت پپتیداز خود را از دست می دهد که منجر به کاهش شدت فلورسانس می شود. این کیت سنجش ساده است و می تواند برای شناسایی و توصیف مهارکننده های ACE2 در یک فرمت با توان عملیاتی بالا استفاده شود.



شکل: مهار فعالیت ACE2 توسط ACE2 Inhibitor ، IC 50 = 33.0 ± 0.6 نانومتر (3 نفر). سنجش پس از پروتکل کیت انجام شد.

شکل: مهار فعالیت ACE2 توسط مهارکننده ACE2، IC 50 = 33.0 ± 0.6 نانومتر (3 نفر). سنجش به تبعیت از پروتکل کیت انجام شد.

توضیحات اطلاعات کلیدی

BN00569

محصول SKU

تست100

سایز

فلورسانس (Ex / Em = 320/420 نانومتر)

روش تشخیص

ACE2 غربالگری / نمایانگر / مطالعه مهارکننده ها و فعال کننده های

کاربردها

  • تست ساده و قابل اعتماد برای نمایش مهارکننده ها و فعال کننده های ACE2
  • سازگار با توان بالا
  • شامل کنترل بازدارنده است

ویژگی ها و مزایا

  • بافر سنجش ACE2
  • بافر رقت ACE2
  • آنزیم ACE2
  • بستر ACE2
  • (0.5 میلی متر(مهارکننده ACE2

اجزای کیت

-20°C

شرایط نگهداری

بسته ژل

شرایط حمل و نقل

فقط برای استفاده از تحقیقات! برای استفاده در انسان نیست.

استفاده

ACE2 عملکرد

کربوکسیپپتیداز که آنژیوتانسین I را به آنژیوتانسین 1-9 تبدیل می کند ، یک پپتید با عملکرد ناشناخته و آنژیوتانسین II به آنژیوتانسین 1-7 ، وازودیلاتور (PubMed:10969042, PubMed:10924499, PubMed:11815627). همچنین قادر به تجزیه کردن آپلین 13 و دینورفین 13 با راندمان بالا است (PubMed: 11815627). با جدا شدن آنژیوتانسین II ، ممکن است یک تنظیم کننده مهم عملکرد قلب باشد (PubMed: 10969042 ، PubMed: 10924499). با جدا شدن آنژیوتانسین II ، ممکن است نقش مهمی در آسیب حاد ریه ها داشته باشد (با شباهت). نقش مهمی در انتقال اسیدهای آمینه با ایفای نقش به عنوان شریک اتصال دهنده حمل کننده اسید آمینه SL6A19 در روده ، تنظیم فعالیت غیر مجاز ، حالت در سطح سلول و فعالیت کاتالیزوری آن بازی می کند (PubMed: 18424768 ، PubMed: 19185582).

ACE2 و کروناویروس

آنزیم 2 (ACE2) تبدیل کننده آنژیوتانسین مشخص شده است که یک گیرنده عملکردی است که جذب SARS-CoV-2 را به سلول های میزبان تسهیل می کند. (منبع) ACE2 در مکانهای مختلف و انواع سلول بیان شده است ، از جمله سلولهای اپیتلیال آلوئول ، انتروسیتهای سطحی در روده کوچک و سلولهای اندوتلیال قلب و کلیه.

ورود کروناویروس به سلولهای مستعد توسط زیر واحد S1 گلیکوپروتئین تراغشایی کروناویروس صورت میگیرد (معمولاً به اختصار "S" بیان میگردد). (منبع) S1 حاوی یک دامنه اتصال دهنده گیرنده در باقیمانده 318-510 ، که به مانده LYS341 ACE2 با قرابت وابستگی بالا می شناسد متصل می شود. (منبع) وابستگی CoV-2 نسبت به CoV بیشتر است. (منبع)

افزایش میل اتصال به ACE2 انسانی با افزایش راندمان انتقال در شیوع قبلی SARS-CoV ارتباط دارد. (منبع) آنتی بادی های تولید شده علیه SARS-CoV-2 زیر واحد S2 را هدف قرار می دهد ، که مسئول همجوشی غشای ویروسی و میزبان است. بنابراین ، خنثی سازی زیر واحد S2 مانع ورود ویروسی به سلول های آسیب پذیر می شود. (منبع) آنتی بادی های پلی کلونال در برابر پروتئین S از SARS-CoV نشان داده شده است که به طور قابل توجهی توانایی SARS-CoV-2 برای ورود به سلول از طریق ACE2 انسانی کاهش می دهد. (منبع)

اطلاعات کلیدی ACE2

یونیپروت

ACE2

نام ژن

آنزیم تبدیل آنژیوتانسین 2 ، کربوکسی پپتیداز مربوط به ACE ، هومولوگ آنزیم تبدیل کننده آنژیوتانسین ، ACEH ، Metalloprotease MPROT15

نامهای جایگزین

ناحیه خارج سلولی یا ترشح شده ، غشای سلولی ، سیتوپلاسم

محل درون سلولی

واقع شده در سلول های اندوتلیال از شریان های کوچک و بزرگ ، و در سلول های عضله صاف شریانی (در سطح پروتئین) (PubMed: 15141377). بیان شده در سلولهای اپیتلیال آلوئول ریه ، انتروسیتهای روده کوچک ، سلولهای لیدیگ و سلولهای سرتولی (در سطح پروتئین) (PubMed: 15141377). بیان شده در لوله پروگزیمال کلیوی و روده کوچک (در سطح پروتئین) (PubMed: 18424768). بیان شده در قلب ، کلیه ، بیضه و دستگاه گوارش (PubMed: 10969042 ، PubMed: 10924499 ، PubMed: 15231706 ، PubMed: 12459472 ، PubMed: 15671045).

ویژگی بافت

در قلب نامنظم تنظیم می شود.

القاء

کیت سنجش فعالیت ACE 2 – پروتکل

روش گام

198 میکرولیتر از بافر رقیق کننده ACE2 را به ویال آنزیم ACE2 اضافه کنید. آنزیم رقیق شده می تواند
در دمای 20 درجه سانتیگراد در محل های نگهداری قرار گیرد. برای هر چاه (آنزیم کنترل-EC ، Sample-S ، مهارکننده کنترل- IC و حلال کنترل- SC) ، 50 میکرولیتر از محلول کار آنزیم ACE2 را تهیه کنید:

                کنترل پیش زمینه (BC)                                                                             EC ، S ، SC و IC

> 50 میکرولیتر در دقیقه ACE2 بافر سنجش <                                             48 μl ACE2 Assay Buffer    
          >   2 میکرولیتر محلول آنزیم ACE2 رقیق شده  

آماده سازی محلول کاری آنزیم ACE2:

کاندیدای مهارکننده های حل شده در 100 برابر بالاترین غلظت تست نهایی با استفاده از حلال مورد نظر. غلظت تست مورد نظر را با 10 برابر غلظت تست بافر رقیق کننده ACE2 کنید. 10 مهارکننده آزمایش میکرولیتر (نمونه ، S) یا بافر سنجش ACE2 (EC و BC) اضافه کنید. با افزودن 50 میکرولیتر از بافر سنجش ACE2 به ویال حاوی ACE2 مهارکننده ، مهار كنترل بازدارنده را آماده كنید. رای کنترل بازدارنده (IC) ، 10 میکرولیتر از مهار کننده ACE2 را به ظرف (های) حاوی آنزیم ACE2 اضافه کنید. برای مدت زمان 15 دقیقه در دمای اتاق (RT) انکوبه کنید.

ترکیبات غربالگری ، مهارکننده های مهار کننده و آماده سازی کنترل آنزیم:

برای تعداد سنجش هایی که باید انجام شود معرفهای کافی را آماده کنید. برای هر چاه ، 40 میکرولیتر از بستر مخلوط تهیه کنید:

  • 38 میکرولیتر در دقیقه ACE2 Buffer Assay
  • 2 میکرولیتر بستر ACE2

40 میکرولیتر از مخلوط بستر ACE2 را به چشمان کنترل پس زمینه ، کنترل آنزیم / کنترل حلال ، کنترل مهارکننده و نمونه (S) مخلوط کرده و اضافه کنید. خوب مخلوط کنید.

مخلوط لایه ACE2

فلورسانس (Ex / Em = 320/420 نانومتر) را در حالت جنبشی به مدت 1 ساعت در دمای اتاق اندازه گیری کنید.

اندازه گیری:

5th Mar 2020 Seán Mac Fhearraigh PhD

Recent Posts