101 எலிசா சரிசெய்தல் உதவிக்குறிப்புகள்

101 ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்வதற்கான உதவிக்குறிப்புகள்

எங்கள் 101 ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்வதற்கான உதவிக்குறிப்புகள் வழிகாட்டி, ஆய்வாளர்கள் தங்கள் ELISA கருவிகளுடன் மதிப்பீடுகளைச் செய்யும்போது ஏற்படும் பொதுவான சிக்கல்களை மேம்படுத்தவும் சரிசெய்யவும் உதவும் வகையில் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது. உங்கள் ELISA-வை மேம்படுத்துவதும், சோதனையின்போது ஏற்படும் பொதுவான தவறுகளை நீக்குவதும் உங்கள் முடிவுகளையும், உங்கள் ELISA மதிப்பீடுகளின் உணர்திறனையும் வியத்தகு முறையில் மேம்படுத்தலாம். இந்த ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யும் வழிகாட்டியில், ஆராய்ச்சியாளர்கள் தங்கள் ELISA உடனான சிக்கல்களை எதிர்கொள்ளும் பொதுவான பகுதிகளை விவரித்துள்ளோம்.

101 ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யக்கூடிய பகுதிகள்

அதிகப்படியான சமிக்ஞை:

போதிய அளவு தட்டு கழுவாமல் இருப்பது, எதிர்வினை நிறுத்தாமல் இருப்பது மற்றும் கண்டறியும் வினையாக்கியை அதிகப்படியாக சேர்ப்பது உள்ளிட்ட பல காரணங்களுக்காக அதிகப்படியான சமிக்ஞை ஏற்படலாம். உங்கள் சோதனையின்போது அதிகப்படியான சமிக்ஞை ஏற்பட்டால், இது நிறைய தவறான நேர்மறைகளையும் தவறான தரவையும் கொடுக்கும்.

வரம்பிற்கு அப்பால்:

சில நேரங்களில் இது உங்கள் மாதிரிகள், போதுமான அளவு கழுவாமல் இருத்தல் அல்லது தயாரிக்கப்பட்ட தவறான நீர்த்தங்களின் அடிப்படையில் நிகழலாம். இது எதிர்மறை முடிவுகள் அல்லது முடிவுகள் இன்மை காரணமாக தரவு இழப்பை ஏற்படுத்தக்கூடும்.

அதிகப்படியான மாறுபாடு:

மாதிரியை தயார் செய்யும் முறையில் தவறுகள், உறிஞ்சளவி பிழைகள் மற்றும் முரண்பாடுகள், பிற சிக்கல்கள் மத்தியில் போதிய அளவு தட்டு கிளர்ச்சி இன்மை காரணமாக அதிக மாறுபாடு ஏற்படலாம். அதிக மாறுபாடு கொண்ட தரவு உண்மையான முடிவுகளை கொடுக்கத் தவறலாம் மற்றும் உங்கள் தரவில் முரண்பாடுகளை ஏற்படுத்தலாம்.

அதிகப்படியான பின்னணி:

போதிய அளவு கழுவும் படிநிலைகள் இல்லாமை, மாதிரிகளின் குறுக்கு வினைத்திறன் அல்லது மாசுபாட்டால் அதிகப்படியான பின்னணி ஏற்படலாம். மீண்டும் அதிகப்படியான பின்னணி தவறான நேர்மறை / எதிர்மறை தரவை ஏற்படுத்தி, உங்கள் முடிவுகளை பாதிக்கலாம்.

சமிக்ஞை இல்லை

உங்கள் ELISA மதிப்பீட்டில் எந்த சமிக்ஞையும் பல மாதிரி மற்றும் மதிப்பீட்டு சிக்கல்களால் ஏற்படக்கூடும், வாஷ் பஃபர் உள்ளிட்டவை அசைடுகளைக் கொண்டிருக்கின்றன, மதிப்பீட்டைக் கண்டறிவதற்கு கீழே இலக்கு அல்லது அவிடின்-எச்ஆர்பி சேர்க்கப்படவில்லை. எந்த சமிக்ஞையும் விலைமதிப்பற்ற மாதிரிகளிலிருந்து எந்த முடிவுகளையும் குறிக்காது, இந்த சிக்கல்களைத் தவிர்ப்பதற்கு கீழேயுள்ள காரணங்களைப் படிக்கவும்.

மோசமான நிலையான வளைவு:

சரியாக தயாரிக்கப்படாவிட்டால், மோசமான நிலையான வளைவு வெளியிடப்படாத முடிவுகளை நிரூபிக்கும். காரணங்கள் சேர்க்கப்படலாம், மறுஉருவாக்கங்கள் மோசமாக கலக்கப்படுகின்றன, தரநிலை சீரழிந்துவிட்டது அல்லது பிழைகள் பிழைகள் உள்ளன.


அதிகப்படியான சமிக்ஞைக்கான ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யும் உதவிக்குறிப்புகள்

1.

TMB அடி மூலக்கூறு கரைசல் மாசுபட்டது

புதிய TMB அடி மூலக்கூறு கரைசலைப் பயன்படுத்துங்கள், குழிகளில் ஊற்றுவதற்கு முன் அவை தெளிவாகவும், நிறமற்றதாகவும் இருக்க வேண்டும். குழிகளில் அடி மூலக்கூறு கரைசலை உறிஞ்சளவி மூலம் ஊற்றுவதற்கு முன் சுத்தமான வி வடிவம் உடைய அடிப்பகுதி கொள்கலனைப் பயன்படுத்தவும். கிணறுகளில் அடி மூலக்கூறு கரைசலை குழாய் பதிப்பதற்கு முன் சுத்தமான வி பாட்டம் கொள்கலனைப் பயன்படுத்தவும்.

2.

எதிர்வினை நிறுத்தப்படவில்லை

அடி மூலக்கூறு எதிர்வினை நிறுத்தப்படாவிட்டால் நிறம் தொடர்ந்து அதிகரிக்கும்.

3.

தட்டு படிப்பானில் படிப்பதற்கு முன்பு தட்டு மிக நீண்ட நேரம் அப்படியே வைக்கப்பட்டுவிட்டது.

நிறம் தொடர்ந்து அதிகரிக்கும் (நிறுத்த கரைசல் சேர்க்கப்பட்டால் கூட மெதுவான விகிதத்தில் அதிகரிக்கும்)

4.

ஆய்வக கண்ணாடி பொருட்களிலிருந்து அசுத்தங்கள்

வினையாக்கிகள் புதியதாகவும், தூய்மையான கண்ணாடி பொருட்களில் தயாரிக்கப்படுவதையும் உறுதிசெய்க

5.

வெளிச்சத்தில் அடி மூலக்கூறு அடைகாப்பு நடைபெறுதல்

அடி மூலக்கூறு அடைகாத்தல் இருட்டில் மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும். இருண்ட இடத்தில் அதனை சேமித்து வைக்க வேண்டும், வெளிச்சத்தில் மூலக்கூறு வெளிப்படுவதில்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும். மதிப்பீட்டை இயக்கும் போது ஒளியின் வெளிப்பாட்டைக் கட்டுப்படுத்துங்கள்.

6.

குழிகள் போதுமான அளவு கழுவப்படவில்லை

நெறிமுறை பரிந்துரைகளின்படி குழிகளை கழுவவும்.

7.

அதிகப்படியான கண்டறிதல் வினையாக்கி சேர்க்கப்பட்டது

வினையாக்கி சரியாக நீர்த்தப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது கண்டறிதல் வினையாக்கியின் பரிந்துரைக்கப்பட்ட செறிவைக் குறைக்கவும்.

8.

தடுக்கும் இடையகம் திறனற்றதாக இருக்கிறது (எ.கா. கண்டறியும் வினையாக்கி தடுப்பானை பிணைக்கிறது; குழிகள் முற்றிலும் தடுக்கப்படவில்லை)

வேறு தடுக்கும் வினையாக்கியை முயற்சிக்கவும் மற்றும் / அல்லது இடையகத்தை கழுவுவதற்கு தடுப்பு வினையாக்கியை சேர்க்கவும்.

9.

அடைகாக்கும் / கழுவும் இடையகங்களின் உப்பு செறிவு

உப்பு செறிவுகளை அதிகரிப்பது குறிப்பிடப்படாத வகையில் இலக்கு குறிப்பிடப்படாத மற்றும் / அல்லது பலவீனமான இலக்கு தொடர்புகளை குறைக்கலாம்.

10.

அதிகப்படியான ஆன்டிபாடி செறிவு

உகந்த முடிவுகளுக்கு வெவ்வேறு நீர்த்தங்களை முயற்சிக்கவும்.

11.

அடி மூலக்கூறை சேர்க்கும்போது குழிகளில் உருவாகும் படிமம்

மாதிரியின் நீர்த்த காரணியை அதிகரிக்கவும் அல்லது அடி மூலக்கூறின் செறிவை குறைக்கவும்.

12.

அழுக்கு தட்டு

தட்டின் அடிப்பகுதியை சுத்தம் செய்யுங்கள்.

13.

தயாரிக்கப்பட்ட தவறான நிலையான வளைவு நீர்த்தங்கள்

உங்கள் உறிஞ்சளவியின் செயல்முறை நுட்பத்தை சரிபார்க்கவும். உறிஞ்சளகளின் அளவுத்திருத்தம் தேவைப்படலாம்.

14.

பரிந்துரைக்கப்பட்டதை விட நீண்ட அடைகாக்கும் நேரம்

உங்கள் அடைகாக்கும் நேரம் சரியானதா என்பதை உறுதிசெய்து, தொழில்நுட்ப கையேட்டில் வழங்கப்பட்ட நெறிமுறையை பின்பற்றுங்கள்.

15.

தட்டு சீலர்கள் அல்லது வினையாக்கி தேக்கங்கள் மீண்டும் பயன்படுத்தப்பட்டன, இதன் விளைவாக HRP எஞ்சுகிறது. இது குறிப்பிடப்படாத வகையில் TMB-யை நீல நிறமாக மாற்றும்

தட்டு சீலர்களின் மறுபயன்பாடு எஞ்சிய HRP இன் இருப்பிற்கு வழிவகுக்கும், இது TMB இன் குறிப்பிடப்படாத வண்ண மாற்றத்திற்கு வழிவகுக்கும். இதைத் தவிர்க்க ஒவ்வொரு அடிநிலையிலும் புதிய தட்டு சீலர் மற்றும் வினையாக்கி நீர்த்தேக்கத்தை பயன்படுத்துங்கள்.

16.

இடையகங்களின் மாசுபாடு

எப்போதும் புதிய இடையகங்களை தயார் செய்யுங்கள்.


வரம்பிற்கு அப்பால் செல்வதற்கு ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யும் உதவிக்குறிப்புகள்

17.

மாதிரிகளில் கண்டறியக்கூடிய அளவுகள் மதிப்பாய்வுக்கூறுகள் இல்லை அல்லது அதற்குக் குறைவாக உள்ளன

மாதிரிகள் கண்டறியக்கூடிய அளவிற்குக் குறைவாக இருந்தால், அதிக மாதிரி அளவைப் பயன்படுத்தலாம். பொருத்தமான நெறிமுறை மாற்றங்களுக்கு தொழில்நுட்ப உதவியை நாடவும்

18.

மாதிரிகள் மிக உயர்ந்த நிலையான புள்ளியை விட பகுப்பாய்வு செறிவுகளை அதிகமாகக் கொண்டுள்ளன

மாதிரிகளுக்கு மேலும் நீர்த்தல் தேவைப்படலாம்

19.

போதுமான அளவு கழுவாமை

பொருத்தமான கழுவும் முறையைப் பயன்படுத்தவும் - கீழே காண்க. ஒவ்வொரு சலவை படிநிலையின் முடிவிலும், உறிஞ்சக்கூடிய திசுக்களில் தட்டைத் தலைகீழாக மாற்றி, முழுமையாக வடிய அனுமதிக்கவும், ஏதேனும் எஞ்சியிருக்கும் திரவத்தை அகற்ற தேவைப்பட்டால் வேகமாக தட்டவும்.

20.

தட்டு சீலர்கள் பயன்படுத்தப்படவில்லை அல்லது மீண்டும் பயன்படுத்தப்பட்டது

அடைக்காப்பின் போது, ​​தட்டு சீலர்களுடன் மதிப்பீட்டு தகடுகளை மூடவும். ஒவ்வொரு முறையும் தட்டு திறக்கப்படும் போது புதிய சீலரைப் பயன்படுத்தவும். இது கிணறுகள் ஒன்றுக்கொன்று மாசுபடுவதைத் தடுக்கும்.

21

தவறான நீர்த்தங்கள் தயாரிக்கப்பட்டுள்ளன

உறிஞ்சலாவியின் செயல்முறை நுட்பத்தை சரிபார்க்கவும் - கீழே காண்க - மற்றும் கணக்கீடுகளை இருமுறை சரிப்பார்க்கவும்.

22.

பரிந்துரைக்கப்பட்டதை விட நீண்ட அடைகாப்பு நேரம்

தயாரிக்கப்பட்ட கருவிகள் உகந்த நெறிமுறைகளைக் கொண்டுள்ளன. பரிந்துரைக்கப்பட்ட அடைகாக்கும் நேரங்களைப் பின்பற்றுவதை உறுதிசெய்க. ஆன்டிபாடி ஜோடிகளைப் பயன்படுத்தி ELISA-வை உருவாக்கினால், நீங்கள் மதிப்பீட்டை மேம்படுத்த வேண்டியிருக்கும். மேலும் தகவலுக்கு ELISA மேம்பாடு மற்றும் உகப்பாக்கம் குறித்த பக்கத்தை பார்க்கவும்.

23.

அடி மூலக்கூறு கரைசல் மிக விரைவாக கலந்து நீல நிறமாக மாறியது

அடி மூலக்கூறு கரைசலை கலந்து உடனடியாக பயன்படுத்த வேண்டும்

24.

அதிகப்படியான ஸ்ட்ரெப்டாவிடின்-HRP

நீர்த்தலைச் சரிபார்க்கவும், தேவைப்பட்டால் டைட்ரேட் செய்யவும்

25.

தட்டு சீலர்கள் அல்லது வினையாக்கி நீர்த்தேக்கங்கள் மீண்டும் பயன்படுத்தப்பட்டன, இதன் விளைவாக HRP எஞ்சியிருக்கும். இது TMB-யை குறிப்பிடாத வகையில் நீலமாக மாற்றும்.

ஒவ்வொரு படிநிலையிலும் புதிய தட்டு சீலர் மற்றும் வினையாக்கி நீர்த்தேக்கத்தைப் பயன்படுத்தவும்

26.

உலோகங்கள் அல்லது HRP மூலம் மாசுபடுத்தப்பட்ட இடையகங்கள்.

புதிய இடையகங்களை தயார் செய்யுங்கள்

அதிக ஏற்ற இறக்கங்களுக்கு ELISA சரிசெய்தல்

27.

மல்டிசனல் உறிஞ்சளவி பிழைகள்

உறிஞ்சளவியை அளவுதிருத்தம் செய்யுங்கள்

28.

தட்டு கழுவுதல் போதுமானதாகவோ அல்லது சீராகவோ இல்லை

உறிஞ்சளவி நுனிகள் இறுக்கமாக பாதுகாக்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும். அனைத்து கழுவும் படிநிலைகளிலும் அனைத்து வினையாக்கிகளையும் அகற்றுவதை உறுதிப்படுத்தவும்

29.

ஒரே மாதிரியான மாதிரிகள் இல்லாமை

உறிஞ்சளவி மூலம் உறிஞ்சுவதற்கு முன் மாதிரிகளை நன்கு கலக்கவும்

30.

மாதிரிகள் அதிக குறிப்பிட்ட பருப்பொருளைக் கொண்டிருக்கலாம்

மையவிலக்கு மூலம் துகள் பொருளை அகற்றவும்

31.

போதுமான தட்டு கிளர்ச்சியின்மை

குழிகளில் கரைசல்கள் தெறிக்காமல் நிலையான இயக்கத்திற்குள் இருக்கும் வேகத்தில் ELISA தட்டு ஷேக்கரைப் பயன்படுத்தி அனைத்து அடைகாக்கும் படிநிலைகளிலும் தட்டு கிளர்ச்சியடைய வேண்டும்

32.

அதிக குழி மாசுப்பாடு

தட்டு சீலர்களை மீண்டும் பயன்படுத்தும் போது, ​​எந்தவொரு வினையாக்கியும் சீலரைத் தொடவில்லை என்பதைச் சரிபார்க்கவும். வினையாக்கியை சேர்ப்பதற்கு பயன்படுத்தப்பட்ட அதே உறிஞ்சுளவி முனைகளை பயன்படுத்தும்போது கவனமாக இருக்க வேண்டும். உறிஞ்சுளவி முனைகள் தட்டில் உள்ள வினையாக்கிகள் மீது படாமல் இருப்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.

33.

அடைகாக்கும் போது அடுக்கப்பட்ட தட்டுகள்

தட்டுகளை அடுக்கி வைப்பது தட்டுகளின் குழிகள் முழுவதும் வெப்பநிலை சமமாக பரவுவதை அனுமதிக்காது. அடுக்குவதைத் தவிர்க்கவும்.

34.

உறிஞ்சளவி சீராக இல்லை

உறிஞ்சளவிகள் சரியாக வேலை செய்வதையும், அளவு திருத்தும் செய்யப்பட்டிருப்பதையும் உறுதிப்படுத்தவும். ஒரு நல்ல முத்திரையை உருவாக்க உறிஞ்சளவி நுனிகள் போதுமான அளவு தள்ளப்படுவதை உறுதிசெய்க. தட்டில் நீர்ப்பெருக்கு செய்யும்போது கவனமாக இருங்கள், குறிப்பாக உறிஞ்சளவி நுனிகள் அனைத்தும் சரியான அளவு திரவத்தை வெளியிடுகின்றனவா என்பதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள்.

35.

ஆன்டிபாடி நீர்த்தங்கள் / வினையாக்கிகள் நன்கு கலக்கப்படவில்லை

அனைத்து குழிகளிலும் சீரான செறிவை உறுதிசெய்ய, தட்டுகளில் உறிஞ்சளவி மூலம் நீர்ப்பெருக்கு செய்யும்போது அனைத்து வினையாக்கிகளும் மாதிரிகளும் கலக்கப்படுவதை உறுதிசெய்க.

36.

நன்றாக உலர அனுமதிக்கப்பட்டது

அடைகாக்கும் போது எல்லா நேரங்களிலும் தட்டுகள் மூடியிருப்பதை உறுதி செய்யுங்கள். ஈரப்பதமூட்டும் நீர் தட்டில் (சுத்தமான/தொற்று நீக்கப்பட்ட பாட்டில் தண்ணீர்) இன்குபேட்டரின் (அடைக்காப்பியின்) அடிப்பகுதியில் வைக்கவும்.

37.

தட்டின் அடிப்பகுதி அழுக்காக இருக்கிறது

தட்டுகளை மீண்டும் வாசிப்பதற்கு முன்பு தட்டின் அடிப்பகுதியை கவனமாக சுத்தம் செய்யுங்கள்

38.

குழிகளில் குமிழ்கள்

தட்டு வாசிப்பதற்கு முன்பு குமிழ்கள் இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்

39.

விளிம்பு விளைவுகள்

தட்டு மற்றும் அனைத்து வினையாக்கிகளும் அறை வெப்பநிலையில் இருப்பதை உறுதிசெய்க

40.

சேமிப்பு

வினையாக்கிகள் மற்றும் மாதிரிகள் சரியான வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்படுவதை உறுதி செய்க.

41.

பிடிப்பு ஆன்டிபாடி தட்டுடன் பிணைக்கப்படவில்லை

நீங்கள் ELISA தட்டு பயன்படுத்துகிறீர்கள், திசு வளர்ப்பு தட்டை பயன்படுத்தவில்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும். PBSல் ஆன்டிபாடியை நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள். பூச்சு மற்றும் தடுப்பு படிநிலைகளுக்கு சரியான தயாரிப்பு மற்றும் அடைகாக்கும் நேரத்தை உறுதி செய்யுங்கள்.

42.

நெறிமுறைகளில் மாறுபாடுகள்

உங்கள் மதிப்பீட்டில் வரும் நெறிமுறையைப் பின்பற்றுங்கள்

43.

நிலையான வளைவின் முறையற்ற கணக்கீடுகள்

கணக்கீடுகளைச் சரிபார்க்கவும், புதிய நிலையான வளைவை உருவாக்கவும் மற்றும் உள் கட்டுப்பாடுகளைப் பயன்படுத்தவும்

44.

இடையகங்கள் அசுத்தமானவை

புதிய இடையகங்களைப் பயன்படுத்தவும்

45.

குழி அடிப்பகுதி அகற்றப்பட்டது

உறிஞ்சளவி மூலம் திரவத்தை மாற்றும்போது அடிப்பகுதி மீது படுவதை தவிர்க்கவும். அடிப்பகுதிக்கு இடையூறு ஏற்படுவதைத் தவிர்க்க குழியின் பக்கத்திற்கு உறிஞ்சளவி நுனியைக் குறி வைக்கவும்.

அதிகப்படியான பின்புலத்திற்கான ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யும் உதவிக்குறிப்புகள்

46.

பின்புல குழிகள் மாசுபட்டன

சீலரை சரியான முறையில் பயன்படுத்துவதன் மூலம் குளிகளுக்கு இடையேயான மாசுப்பாட்டைத் தவிர்க்கவும். தட்டில் உள்ள வினையாக்கிகளைத் தொடாமல் மல்டிசனல் உறிஞ்சளவிகளைப் பயன்படுத்தவும்.

47.

பயன்படுத்தப்படும் மேட்ரிக்ஸில் உள்ளார்ந்த பகுப்பாய்வு கூறுகள் அல்லது குறுக்கீடு உள்ளது

குறுக்கு எதிர்வினை கூறுகளுக்கான மேட்ரிக்ஸ் பொருட்களை சரிபார்க்கவும் (எ.கா. இன்டர்லூகின் மாற்றியமைக்கப்பட்ட திசு வளர்ப்பு ஊடகம்).

48.

போதுமான கழுவல்கள் இல்லாமை

கழுவும் எண்ணிக்கையை அதிகரிக்கவும். அடி மூலக்கூறு கரைசலைச் சேர்ப்பதற்கு முன்பு கழுவுவதற்கு இடையில் ஊறவைக்கும் நேரத்தை அதிகரிக்கவும்.

49.

குறுக்கு வினைத்திறன்

கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி பூச்சு ஆன்டிபாடியுடன் குறுக்கு-எதிர்வினை ஆற்றுதல். பொருத்தமான கட்டுப்பாடுகளை இயக்கவும்.

50.

ஆன்டிபாடிகளின் குறிப்பிடப்படாத பிணைப்பு

ஒரு தடுப்பு படிநிலை சேர்க்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிசெய்து, பொருத்தமான தடுப்பு இடையகம் பயன்படுத்தப்படுகிறது என்பதையும் உறுதி செய்யவும். அதே இன இரண்டாம் நிலை ஆன்டிபாடி அல்லது போவின் சீரம் போன்றவற்றின் 5 முதல் 10% சீரம் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கிறோம். குறிப்பிடப்படாத இணைப்பைத் தடுக்க கிணறுகள் முன்கூட்டியே பதப்படுத்தப்பட்டிருப்பதை உறுதிசெய்க, முன் உறிஞ்சப்படும், ஒரு சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆன்டிபாடியைப் பயன்படுத்துங்கள்

51.

இணைந்த இரண்டாவது ஆன்டிபாடியின் செறிவு மிக அதிகமாக உள்ளது

உகந்த வேலை செய்யும் செறிவை தீர்மானிக்க டைலூஷன் (நீர்ப்பெருக்குகள்) செய்யுங்கள்.

52.

தவறான மதிப்பீட்டு வெப்பநிலை

அடைகாக்கும் வெப்பநிலை 37 டிகிரி செல்சியஸை விட அதிகமாக இல்லை என்பதை சரிபார்க்கவும்

53.

கழுவுதல் போதாது

அனைத்து குழிகளும் கழுவும் இடையகத்தால் நிரப்பப்படுவதை உறுதிசெய்து, முழுமையாக உறிஞ்சி நீக்கப்படுவதை உறுதி செய்க. கிடைக்கப்பெற்றால் தானியங்கி தட்டு வாஷர் பயன்படுத்தவும். கழுவும் எண்ணிக்கையை அதிகரிக்கவும். கழுவுவதற்கு இடையில் 30 வினாடி ஊறவைக்கவும்.

54.

மாதிரியில் இருக்கும் மாசுபடுத்தும் நொதிகள்

மாசுபடுத்தும் நொதி செயல்பாட்டை சரிபார்க்க, அடி மூலக்கூறுடன் மட்டும் மாதிரியை சோதியுங்கள்

55.

குழிகள் போதுமான அளவில் கழுவப்படுவதில்லை

கழுவும் குழிகள் ஒரு நெறிமுறை பரிந்துரைகளுக்கு உட்பட்டவை.

56.

அசுத்தமான கழுவும் இடையகம்

புதிய இடையகங்களைத் தயாரிக்கவும்

57.

அதிகப்படியான கண்டறியும் வினையாக்கி

வினையாக்கி சரியாக நீர்க்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது கண்டறியும் வினையாக்கியின் பரிந்துரைக்கப்பட்ட செறிவைக் குறைக்கவும்

58.

திறனற்ற தடுப்பு இடையகம்

வேறு தடுப்பு இடையக வினையாக்கியை முயற்சிக்கவும் மற்றும் / அல்லது இடையகத்தை கழுவுவதற்கு தடுப்பு வினையாக்கியை சேர்க்கவும்

59.

அடைகாக்கும் / கழுவும் இடையகங்களின் உப்பு செறிவுகள்

உப்பு செறிவுகளை அதிகரிப்பது குறிப்பிடப்படாத மற்றும் / அல்லது பலவீனமான இலக்கு தொடர்புகளை குறைக்கலாம்.

60.

நிறுத்த கரைசலைச் சேர்த்த பிறகு தட்டு படிக்க நீண்ட நேரம் காத்திருத்தல்

நிறுத்த கரைசலைச் சேர்த்த உடனேயே தட்டைப் படியுங்கள்

61.

அதிக ஆன்டிபாடி செறிவு

உகந்த முடிவுகளின் வெவ்வேறு நீர்த்தங்களை முயற்சிக்கவும்

62.

அடி மூலக்கூறு அடைகாத்தல் வெளிச்சத்தில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது

அடி மூலக்கூறு அடைகாத்தல் இருட்டில் அல்லது உற்பத்தியாளரால் பரிந்துரைக்கப்பட்டபடி மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்.

63.

அடி மூலக்கூறு சேர்க்கும்போது குழிகளில் உருவாகும் படிமம்

மாதிரியின் நீர்த்த காரணியை அதிகரிக்கவும் அல்லது அடி மூலக்கூறின் செறிவை குறைக்கவும்

64.

அழுக்கு தட்டு

துடைப்பால் தட்டின் அடிப்பகுதியை சுத்தம் செய்யுங்கள்

சமிக்ஞையின்மைக்கான ELISA பிழைக்கண்டு சரிசெய்யும் உதவிக்குறிப்புகள்

65.

தவறான கண்டறியும் ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்பட்டுள்ளது அல்லது கண்டறியும் ஆன்டிபாடி சேர்க்கப்படவில்லை

பொருத்தமான கண்டறியும் ஆன்டிபாடியைச் சேர்த்து தொடரவும்

66.

அவிடின்-HRP சேர்க்கப்படவில்லை

நெறிமுறையின்படி அவிடின்-HRPயைச் சேர்த்து தொடரவும்

67.

அடி மூலக்கூறு கரைசல் சேர்க்கப்படவில்லை

அடி மூலக்கூறு கரைசலைச் சேர்த்து தொடரவும்

68.

கழுவும் இடையகத்தில் அசைடு உள்ளது

கழுவும் இடையகத்தில் சோடியம் அசைடைத் தவிர்க்கவும்

69.

அடைகாக்கும் நேரம் மிகக் குறைவு

4’ செல்சியஸில் ஒரே இரவில் மாதிரிகளை அடைக்காக்கவும் அல்லது உற்பத்தியாளர்களின் வழிகாட்டுதல்களைப் பின்பற்றவும்

70.

மதிப்பீட்டின் கண்டறிதல் வரம்புகளுக்குக் கீழே உள்ள இலக்கு

நீர்த்த காரணி குறைக்கவும் அல்லது மாதிரிகள் செறிவை அதிகரிக்கவும்

71.

பொருந்தாத மாதிரி வகை

சோதிக்கப்படாத மாதிரி வகைகளில் கண்டறிதல் குறைவாக இருக்கலாம் அல்லது இல்லாமல் இருக்கலாம். நேர்மறை கட்டுப்பாட்டைக் கண்டறிய மதிப்பீடு அறியப்பட்ட ஒரு மாதிரியைச் சேர்க்கவும்

72.

உறிஞ்சுதல் தட்டு மூலம் தடைப்படும் எபிடோப் கண்டறிவு

நேரடி அல்லது மறைமுக ELISA மூலம் ஒரு பெப்டைட்டைக் கண்டறிவதை மேம்படுத்த, ஒரு மைக்ரோடிட்டர் தட்டில் பூசுவதற்கு முன் பெப்டைடை ஒரு பெரிய கேரியர் புரதத்துடன் இணைக்கவும்

73.

மதிப்பீட்டு இடையக இணக்கமின்மை

மதிப்பீட்டு இடையகம் இலக்குடன் இணக்கமாக இருப்பதை உறுதிசெய்க (எ.கா. நொதி செயல்பாடு தக்கவைக்கப்படுகிறது, புரத தொடர்புகள் தக்கவைக்கப்படுகின்றன.)

74.

போதுமான கண்டறியும் வினையாக்கி இல்லை

உற்பத்தியாளர் வழிகாட்டுதல்களைத் தொடர்ந்து கண்டறியும் வினையாக்கி அளவின் செறிவை அதிகரிக்கவும்

75.

மாதிரி தவறாக தயாரிக்கப்பட்டது

சரியான மாதிரி தயாரிப்பு / நீர்த்தலை உறுதி செய்யுங்கள். மாதிரிகள் மைக்ரோடிட்டர் தட்டு மதிப்பீட்டு வடிவத்துடன் பொருந்தாது

76.

போதுமான அளவு ஆன்டிபாடி இல்லை

ஆன்டிபாடிகளின் வெவ்வேறு செறிவுகள் / நீர்த்தங்களை முயற்சிக்கவும்

77.

அடைகாக்கும் வெப்பநிலை மிகக் குறைவு

அடைகாப்புகள் சரியான வெப்பநிலையில் மேற்கொள்ளப்படுவதை உறுதிசெய்க. தொடங்குவதற்கு முன் தட்டு உள்ளிட்ட அனைத்து வினையாக்கிகளும் அறை வெப்பநிலையில் இருக்க வேண்டும் அல்லது உற்பத்தியாளரால் பரிந்துரைக்கப்படும் வெப்பநிலையில் இருக்க வேண்டும்.

78.

தவறான அலைநீளம்

அலைநீளத்தை சரிபார்த்து மீண்டும் தட்டை வாசிக்கவும்

79.

தட்டு கழுவுதல் மிகவும் வேகமாக இருக்கிறது

தானியங்கி தட்டு வாஷரில் சரியான அழுத்தத்தை சரிபார்க்கவும். கழுவுதல் கைமுறையாக செய்யப்பட்டால் கழுவும் இடையகத்தை மெதுவாக உறிஞ்சளவி மூலம் உறிஞ்சவும்.

80.

குழிகள் காய்ந்துவிட்டன

மதிப்பீடு தொடங்கியதும் குழிகள் வறண்டு போக அனுமதிக்காதீர்கள். அனைத்து அடைகாப்புகளுக்கும் முத்திரையிடும் படலம் அல்லது டேப்பைப் பயன்படுத்தி தட்டை மூடவும்.

81.

நொதி வினைகளின் மெதுவான வண்ண வளர்ச்சி

பயன்படுத்துவதற்கு முன் உடனடியாக அடி மூலக்கூறு கரைசலைத் தயாரிக்கவும். இருப்பில் இருக்கும் கரைசல் காலாவதியாகவில்லை மற்றும் மாசுபடவில்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும். நீண்ட அடைகாப்பை அனுமதிக்கவும்.

82.

சீரற்ற நிறம்

அனைத்து குழிகளும் சரியாகக் கழுவப்படுவதை உறுதிசெய்து, முடிந்தவரை ELISA தட்டு வாஷரைப் பயன்படுத்துங்கள்

83.

 

 

வினையாக்கிகள் அறை வெப்பநிலையில் இல்லை

மதிப்பீட்டின் தொடக்கத்திலிருந்து அனைத்து வினையாக்கிகளும் அறை வெப்பநிலையில் இருக்க வேண்டும். பெஞ்சில் 15-20 நிமிடங்களைத் தொடர்ந்து அறை வெப்பநிலையை அடைய வேண்டும்.

84.

காலாவதியான வினையாக்கிகள்

பயன்படுத்தப்படும் அனைத்து வினையாக்கிகளும் செல்லுபடியாகும் தேதிக்குள் இருப்பதை உறுதிசெய்க

85.

மதிப்பீட்டு வடிவம் போதுமானதாக இல்லை

மிகவும் உணர்திறன் மிக்க மதிப்பீட்டு வகைக்கு மாறவும் (எ.கா. நேரடி ELISA ஐ சாண்ட்விச் ELISA க்கு மாற்றவும்). அடைகாக்கும் நேரங்களை நீட்டிக்கவும் அல்லது வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும். அல்லது கண்டறிதல் முறையை மாற்றவும்

86.

ஆன்டிபாடிகளை மறுகட்டமைக்கப் பயன்படுத்தப்படும் FCS கொண்ட இடையகம்

பயன்படுத்தப்படும் வினையாக்கிகளை மறு மதிப்பீடு செய்யுங்கள்.

மோசமான நிலையான வளைவுகளுக்கான எலிசா சரிசெய்தல்

87.

தரநிலை முழுமையடையாமல் புனரமைக்கப்பட்டது அல்லது தவறாக சேமிக்கப்பட்டது

வழங்கப்பட்ட நெறிமுறையின்படி தரத்தை மறுசீரமைத்தல் சேமிப்பக வழிமுறைகளை வழங்கவும் பின்பற்றவும்

88.

தவறான செறிவுகளில் குழிகளில் வினையாக்கிகள் சேர்க்கப்பட்டன

உறிஞ்சளவி பிழைகளைச் சரிபார்த்து, வினையாக்கி அளவை சரிசெய்யவும்

89.

தவறான வெப்பநிலையில் செய்யப்படும் அடைகாப்புகள்

சேமிப்பு, அடைகாத்தல் மற்றும் கிளர்ச்சிக்கான நெறிமுறையைப் பின்பற்றவும்

90.

குழிகள் முற்றிலுமாக உறிஞ்சப்பட்டு நீர் நீக்கப்படவில்லை

படிநிலைகளுக்கு இடையே முழுமையாக உறிஞ்சி நீக்கவும், சாத்தியமானால் முடிந்தவரை தட்டு வாஷரைப் பயன்படுத்துங்கள்

91.

அடைகாக்கும் போது அடுக்கப்பட்ட தட்டுகள்

தட்டுகளை பிரித்து வைக்கவும்

92.

மோசமான நீர்த்த தொடர்

நெறிமுறையின்படி நீர்க்கும் படிநிலைகளை சரிபார்க்கவும்

93.

வினையாக்கிகள் மோசமாக கலக்கப்பட்டன

வினையாக்கிகள் முழுமையாக கலப்பதை உறுதி செய்யுங்கள்

94.

தட்டுக்கு வினையாக்கிகளின் மோசமான அல்லது மாறக்கூடிய உறிஞ்சுதல்

பூச்சு இடையகத்தின் தேர்வை சரிபார்க்கவும், பொதுவாக pH 7.4 அல்லது கார்பனேட் பைகார்பனேட் இடையக pH 9.6 உடனான PBS. இந்த அடைகாக்கும் நேரத்தை நீட்டிக்க முயற்சிக்கவும் அல்லது வேறு தட்டுகளைப் பயன்படுத்துவது குறித்து சிந்திக்கவும்

95.

நிலையானது சீர்கெட்டது

நிலையானது சரியாக சேமிக்கப்பட்டுள்ளதா என

96.

சரிபார்க்கவும்வளைவு அளவீடுகளுடன் பொருந்தவில்லை

வெவ்வேறு அளவீடுகளைப் பயன்படுத்த சதி செய்ய முயற்சிக்கவும், எ.கா. பதிவு-பதிவு, 5 அளவுரு லாஜிஸ்டிக் வளைவு பொருத்தம்

97.

உறிஞ்சளவியின் செயல்முறையில் பிழை

உறிஞ்சளவிகளை சரிபார்த்து அளவுத்திருத்தம் செய்யுங்கள்

98.

பிடிப்பு ஆன்டிபாடி தட்டுடன் பிணைக்கப்படவில்லை

நீங்கள் திசு வளர்ப்பு தட்டு அல்ல, ELISA தட்டு பயன்படுத்துகிறீர்கள் என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.

99.

போதுமான கண்டறிதல் ஆன்டிபாடி இல்லை

நீர்த்தலைச் சரிபார்க்கவும், தேவைப்பட்டால் டைட்ரேட் செய்யவும்

100.

நிலையான வளைவு நீர்த்தலின் தவறான கணக்கீடு

உங்கள் கணக்கீடுகளை சரிபார்த்து புதிய வளைவை உருவாக்கவும்.

101.

வெவ்வேறு கருவிகளில் இருந்து வினையாக்கிகளை கலத்தல் அல்லது மாற்றுதல்

இது உங்கள் மதிப்பீட்டின் தரத்தை பாதிக்கும் என்பதால் இதைத் தவிர்க்கவும்

Author: Seán Mac Fhearraigh PhD

ELISA Troubleshooting & Tips