ELISA மதிப்பீடுகள் ஆன்டிபாடி அடிப்படையிலான சோதனையாகும், இது ஒரு மாதிரியில் இருக்கும் பகுப்பாய்வுக்கூறு உடைய அளவை தீர்மானிக்க ஆராய்ச்சியாளர்களை அனுமதிக்கிறது. வீக்கம், வளர்ச்சி காரணிகள் மற்றும் சமிக்ஞை மூலக்கூறுகள் ஆகியவற்றில் கவனம் செலுத்தும் இலக்குகளின் வரம்பை பகுப்பாய்வு செய்ய ELISA மதிப்பீடுகள் பொதுவாக நோயெதிர்ப்பு, நரம்பியல் மற்றும் புற்றுநோய் போன்றவை குறித்த ஆராய்ச்சியில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. முக்கிய இலக்குகளில் IL6, IL8, BDNF & VEGF ஆகியவை அடங்கும்.

ELISA உடைய பொதுவான வகைகள்

பகுப்பாய்வு கூறுகளை அளவிட ஆராய்ச்சியாளர்கள் முக்கியமாகப் பயன்படுத்தும் இரண்டு பொதுவான எலிசா மதிப்பீடுகளின் வகைகள் சாண்ட்விச் ELISA மற்றும் போட்டிச்சார்ந்த ELISA நுட்பங்கள் ஆகும். சாண்ட்விச் (ஆன்டிபாடி தட்டுடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது) மற்றும் போட்டிச்சார்ந்த (ஆன்டிஜென் தட்டுடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது) ELISA மதிப்பீடுகளானது இரண்டு முக்கிய ஆன்டிபாடி பிணைப்பு படிநிலைகளை உள்ளடக்கியது, இவை முக்கியமான கழுவும் படிநிலைகளை கொண்டு பிரிக்கப்படுகின்றன, இவை தீங்கு விளைவிக்கும் காரணிகள், ஒட்டாத ஆன்டிபாடி மற்றும் குறைந்த பிணைப்புகள் உடைய கலப்புகளை அகற்ற அனுமதிக்கின்றன.

TMB எதிர்வினை

ஒரு ELISA பரிசோதனையின் வெளிப்பாட்டை அளவிடுவதற்கு, இறுதியான ஆன்டிபாடி-ஆன்டிஜென் பிணைப்பு கலவைகளைக் கண்டறிய ஏராளமான அடி மூலக்கூறுகள் பயன்படுத்தப்படலாம். கலோரிமெட்ரிக் (கலோரி அளவியல்), கெமிலூமுமினசென்ட் (வேதி ஒளிர்வு) மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் (ஒளிர்வு) அடிப்படையிலான மதிப்பீடுகள் என மூன்று முக்கிய தொழில்நுட்பங்கள் உள்ளன. பொதுவாக ELISA என்பது மாதிரிகளின் கலோரிமெட்ரிக் (கலோரி அளவியல்) அடிப்படையிலான அளவீட்டைக் குறிக்கிறது, இதன் மூலம் TMB (3,3 ’, 5,5’-டெட்ராமெத்திலீன்பென்ஜிடின்) குதிரை முள்ளங்கி பெராக்ஸிடேஸ் இருப்பில் ஹைட்ரஜன் பெராக்சைடை நீராக குறைக்கும் வினையில் ஹைட்ரஜன் நன்கொடையாளராக செயல்படுகிறது. இந்த எதிர்வினை டைமினின் உற்பத்தியால் விளைகிறது, இது திரவத்தின் நிறத்தை நீல நிறமாக மாற்றுகிறது. நீல நிறத்திற்கான இந்த வண்ண மாற்றத்தை ஒரு ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரில் 370 & 650 நானோமீட்டரில் படிக்கலாம். இந்த எதிர்வினையை நிறுத்த சல்பூரிக் அமிலங்கள் மாதிரியில் சேர்க்கப்பட்டு, அதன் விளைவாக மஞ்சள் நிறமாக நிறமாற்றம் ஏற்படுகிறது. பின்னர் ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் பயன்படுத்தி ELISA தட்டை பகுப்பாய்வு செய்து, 450 நானோ மீட்டரில் படிக்கலாம்.

ELISA தட்டை கழுவுவதற்கான காரணங்கள்

ELISA நெறிமுறையின் ஒரு முக்கிய படிநிலை கழுவி சுத்தம் செய்யும் படிநிலையாகும். பின்னணி சமிக்ஞையை குறைப்பதற்கு கழுவும் படிநிலைகள் முக்கியமானவை, இந்த பின்னணி சமிக்ஞை ஒட்டாத, ஒருங்கிணைந்த ஆன்டிபாடியினால் இருக்கலாம், இதன் விளைவாக சமிக்ஞை சத்தத்தின் விகிதம் அதிகரிக்கும். எனவே சலவை படிகள் ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிக்கு இடையில் அதிக நம்பகத்தன்மை கொண்ட பிணைப்பு இடைவினைகள் மட்டுமே ஏற்படுவதை உறுதி செய்கின்றன. சரியாக கழுவாதபோது, இது உயர் பின்னணி அளவுகளை ஏற்படுத்தக்கூடும், இது தரவைப் பெறுவதற்குத் தடையாக இருக்கும், மாதிரிகளுக்கு இடையில் அதிக மாறுபாட்டை ஏற்படுத்தும், இறுதியில் மோசமான முடிவுகளை வழங்கும்.

ELISA சலவை அளவுகள் & அளவுருக்கள்

உங்கள் தட்டு திறம்பட கழுவப்படுவதை உறுதிசெய்ய ELISA தட்டில் சேர்க்கப்படும் கழுவும் இடையகத்தின் அளவு முக்கியமானது. நீங்கள் ELISA தட்டு வாஷர் அல்லது மல்டிசேனல் உறிஞ்சுக்குழல் பயன்படுத்துகிறீர்களா என்பதைப் பொறுத்து, உங்கள் தட்டைக் கழுவும்போது தேவையான அளவிற்கு கவனம் செலுத்துங்கள். ஒவ்வொரு குழியிலும்(சோதனை டியூப்களாக பயன்படுத்தக்கூடியவை) சேர்க்கப்பட்ட பூச்சின் இடையக அளவை விட சலவை இடையக அளவு அதிகமாக இருக்க வேண்டும். உதாரணமாக, உங்கள் தட்டு 100µL பூச்சு இடையகம் கொண்டு பூசப்பட்டிருந்தால், குழியை முழுமையாக கழுவுவதை உறுதிசெய்ய 200 - 350 µL போன்றளவு அதிக அளவு கழுவும் இடையகத்தை நீங்கள் சேர்க்க வேண்டும்.

எலிசா தட்டு கழுவும் தொடர் வரிசைகள்

கழுவும் அளவிற்குப் பிறகு, பின்னணி சமிக்ஞை(சிக்னல்) அகற்றப்படுவதை அதிகரிப்பதற்கு கழுவும் சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை முக்கியமானது, ஆனால் ஆன்டிஜென்-பகுப்பாய்வு கூறுகளின் தேவையற்ற சலவையையும் தவிர்க்க வேண்டும். மாதிரிகள் அதிகமாக கழுவப்பட்டால், இது சமிக்ஞை வலிமையைக் குறைத்து, உங்கள் தரவை அளவிடுவதையும் பகுப்பாய்வு செய்வதையும் கடினமாக்கும். நெறிமுறையில் உள்ள உங்கள் நிலைப்பாட்டைப் பொறுத்து 1-3-5 கழுவும் படிநிலைகள் தேவைப்படலாம். பொதுவாக, முன் பூசப்பட்ட தட்டுகளுக்கு DIY பூசப்பட்ட தட்டுகளை விட குறைவான கழுவும் படிநிலைகள் தேவைப்படுகின்றன, இருப்பினும், இது உற்பத்தியாளர் மற்றும் ELISA தட்டு படிக்கப் பயன்படுத்தப்படும் தொழில்நுட்பத்தைப் பொறுத்தது.

ELISA தட்டு கழுவும் போது இடையகங்களை உறிஞ்சி நீக்குதல் - கையேடு

ELISA நெறிமுறையின் போது இடையகங்களை உறிஞ்சி நீக்குதல் எஞ்சிய இடையக, தேவையற்ற கலவைகள் அல்லது ஆன்டிபாடியை அகற்றுவதற்கு முக்கியமாகும். மல்டிசேனல்(பல வழி) குழாய்களை பயன்படுத்தும் போது, படிநிலைகளுக்கு இடையில் மல்டிசேனல் மீது புதிய குழாய்களின் நுனிகளை வைக்கவும். இடையகத்தை உறிஞ்சி நீக்கும் போது, மல்டிசேனலை சாய்ந்த கோணத்தில் குழியில் வைக்கவும், அதே நேரத்தில் குழிகளின் பக்கத்தையோ அல்லது அடிப்பகுதியையோ தொடக்கூடாது என்பதில் கவனமாக இருங்கள். இடையகத்தை அகற்றியதைத் தொடர்ந்து, நீங்கள் தட்டை தலைகீழாக மாற்றி, மீதமுள்ள இடையகத்தை அகற்ற காகிதத் துண்டுகளில் தட்டைத் தட்டலாம். கழுவும் படிநிலைகள் மற்றும் இடையக படிநிலைகளுக்கு இடையில் தட்டை உலர விடாதீர்கள்.

Author: Seán Mac Fhearraigh PhD